利用基因突變技術(shù)進(jìn)行安普霉素單組分產(chǎn)生菌的選育.pdf

1、黑暗鏈霉菌H6(Streptomyces tenebrarius H6)產(chǎn)生三種抗生素：安普霉素、氨甲酰妥布霉素和少量氨甲酰卡那霉素B。多年來(lái)科研人員對(duì)黑暗鏈霉菌的研究主要集中于常規(guī)誘變育種和優(yōu)化生產(chǎn)工藝等方面，雖然取得一些好的進(jìn)展，但對(duì)其抗生素合成的途徑了解較少。二十世紀(jì)八十年代興起的鏈霉菌基因工程研究，已在抗生素生物合成基因的克隆、產(chǎn)量提高、組分改善及雜合抗生素產(chǎn)生等方面取得長(zhǎng)足的進(jìn)步。為獲得黑暗鏈霉菌H6安普霉素單組分產(chǎn)生菌，對(duì)黑

2、暗鏈霉菌H6染色體上的tacA基因進(jìn)行基因進(jìn)行阻斷實(shí)驗(yàn)，利用基因突變技術(shù)來(lái)選育安普霉素單組分產(chǎn)生菌。 利用PCR分別獲得tacA基因內(nèi)部523bp片段和1063bp片段，將兩片段重新連接到pIJ2925內(nèi)。在構(gòu)建好的質(zhì)粒中加入xy/E報(bào)告基因和ermE基因做為篩選標(biāo)記，構(gòu)建基因阻斷穿梭載體。轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH-5α。經(jīng)接合轉(zhuǎn)移導(dǎo)入黑暗鏈霉菌H6，篩選雙交換阻斷變株。經(jīng)發(fā)酵產(chǎn)物分析，阻斷變株不再合成氨甲酰妥布霉素，只合成安普霉素。