昆明狼犬精液冷凍試驗研究.pdf

1、以昆明狼犬為對象，作了梯度離心法去除精清對犬精液冷凍效果的影響；精液稀釋液配方的篩選及優(yōu)化；精液平衡方法研究；冷凍劑型及冷凍方法的研究；冷凍精液解凍方法的研究；冷凍精液人工授精等試驗。結(jié)果表明： 1、梯度離心法去除精清對犬精液冷凍效果的影響。對5只昆明狼犬新鮮精液進行不離心(對照組)、1000r/min、1500r/min、2000r/min、2500r/min、3000r/min、3500r/min、4000r/min離心去除

2、精清處理，并用篩選出的Ⅰ號稀釋液代替精清，反復(fù)沖洗后行超低溫冷凍，解凍后檢測精子的活率結(jié)果證明：1500r/min離心組活率達43.5±2.43，但與2000r/min組差異不顯著(P＞0.05)，二者與其它組差異均較明顯(P＜0.05)。1500r/min組精子的項體完整率優(yōu)于其它各組(P＜0.05)、精子畸形率最低(24.5±1.87)、生存指數(shù)最高(28.2±1.24)、解凍后4℃條件下精子存活時間可達96h，優(yōu)于其它各組(P＜0

3、.05)。 2、精液稀釋液配方的篩選及優(yōu)化。用篩選出的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組稀釋液分別制作顆粒凍精，解凍后測得結(jié)果表明：Ⅰ組的凍后平均活率優(yōu)于Ⅱ、Ⅲ組，但Ⅰ、Ⅱ組之間差異不顯著(P＞0.05)，均與Ⅲ組差異顯著(P＜0.05)；頂體完整率和畸形率，Ⅰ組均優(yōu)于Ⅱ、Ⅲ組(P＜0.05)。稀釋液優(yōu)化過程中發(fā)現(xiàn)Ⅰ組中分別添加一定量的VB12、COVB和VC不但均能夠提高冷凍-解凍精子的活率，對頂體有保護作用，而且可降低精子的畸形率，但與對照組差異

4、不顯著(P＞0.05)。 3.、精液平衡方法研究。精液稀釋后用16層紗布、8層紗布包被平衡法和100ml、200ml、300ml體積梯度水浴平衡法進行比較，結(jié)果表明：16層紗布包裹放入4℃冰箱內(nèi)平衡3.5～4.0h后再超低溫冷凍，解凍后精子平均活率(43.23％)、生存指數(shù)(27.22±2.45)和體體完整率(77.59％)與200ml水浴組接近(P＞0.05)，與其它組差異顯著(P＜0.05)。 4、精液冷凍劑型及冷凍

5、方法的研究。試驗用炸熏法顆粒、液氮鋁飯盒法顆粒、細管炸熏法及安瓶炸熏法四種冷凍劑型對精液冷凍-解凍后比較結(jié)果表明：炸熏法制作的顆粒凍精活率為43.48±2.07，明顯優(yōu)于液氮鋁飯盒法顆粒、細管和安瓶法(P＜0.05)。用程序冷控法按照程序Ⅰ、程序Ⅱ、程序Ⅲ制作細管凍精，解凍后測得精子活率結(jié)果證明：程序Ⅰ(32.08±3.16)優(yōu)于程序Ⅱ(25.26±0.92)和程序Ⅲ(14.57±2.09)(P＜0.05)。炸熏法顆粒優(yōu)于程序Ⅰ法(P＜

6、0.05)。 5、冷凍精液解凍方法的研究。用干解凍和濕解凍法解凍顆粒凍精的結(jié)果表明：50-55℃水浴條件下干解凍法解凍精子的平均活率(42.30％)高于濕解凍法(P＞0.05)：測得精子頂體完整率的結(jié)果顯示：干解凍法(67.01±2.20)明顯優(yōu)于濕解凍法(p＜0.05)，但前者的精子畸形率顯著高于后者(p＜0.05)。 6、冷凍精液人工授精。將10只母犬隨機分成冷凍精液組(6只)和鮮精組(4只)，用同一公犬精液做供試精