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1、本文以酰氯化方法合成了單端生物素化的聚乙二醇,利用1H—NMR對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。考察了不同生物素與PEG之比對(duì)產(chǎn)物中單端生物素化聚乙二醇含量的影響,結(jié)果表明:生物素/PEG摩爾比為3/2時(shí)為最佳比例。利用生物素化的聚乙二醇與丙交酯合成了五種不同相對(duì)分子質(zhì)量的PLA-PEG-B嵌段共聚物,以1H-NMR、13C-NMR和GPC對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行了表征,驗(yàn)證了PLA-PEG-B的結(jié)構(gòu),并利用峰面積積分計(jì)算PLA-PEG-B嵌段共聚物的相對(duì)分子質(zhì)量分別為
2、12.9、16.0、20.6、24.8、38.0KD。 利用PLA-PEG-B嵌段共聚物,采用納米沉淀方法制備了PLA-PEG-B納米粒子。以透射電子顯微鏡,動(dòng)態(tài)光散射和Zeta電位等手段對(duì)粒子的形貌、粒徑以及表面荷電性進(jìn)行了表征。結(jié)果表明:納米粒子成規(guī)則的球狀,粒度均一且分散性良好,粒徑均在100nm以下,納米粒子的粒徑隨相對(duì)分子質(zhì)量的增加而逐漸增加;隨著嵌段共聚物中PLA鏈段的增加,粒子的Zeta電位值降低(-16.7mV~
3、-23.4mV),但均大于PLA微球的Zeta電位值(-35.3mV)。利用熒光標(biāo)記方法和酶聯(lián)免疫方法驗(yàn)證了PLA-PEG-B納米粒子具有較強(qiáng)的配體結(jié)合能力。 以轉(zhuǎn)鐵蛋白作為靶向因子對(duì)PLA-PEG-B納米粒子表面進(jìn)行生物功能化。以DiI為熒光染料對(duì)納米微粒進(jìn)行熒光標(biāo)記。利用熒光倒置顯微鏡下對(duì)所得的納米粒子進(jìn)入細(xì)胞的過(guò)程進(jìn)行了跟蹤研究。研究表明:PLA-PEG-B-Tf納米粒子1h時(shí)附著在細(xì)胞上,2h時(shí)已進(jìn)入細(xì)胞,且隨時(shí)間增加,
4、細(xì)胞內(nèi)的納米粒子越來(lái)越多,至16h時(shí)納米粒子清楚地顯示出細(xì)胞輪廓。PLA-PEG-B-Tf的細(xì)胞吞噬速率明顯快于PLA-PEG-B納米粒。 以顱內(nèi)荷膠質(zhì)瘤的SD大鼠為動(dòng)物模型,通過(guò)尾靜脈注射考察PLA-PEG-B-Tf納米粒子在大鼠體內(nèi)的分布及腦膠質(zhì)瘤靶向性。研究表明:PLA-PEG-B-Tf納米粒子注入大鼠體內(nèi)24h后,大部分被肝、脾攝取,但比PLA-PEG-B納米粒子被肝、脾的攝取量明顯要少。而且在腦瘤部位發(fā)現(xiàn)納米粒子的存在
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