激活素A在5-6腎切除大鼠模型中的表達(dá)及藥物干預(yù)研究.pdf

1、目的：腎纖維化是多種慢性腎臟病逐漸進(jìn)展至終末期腎衰竭的共同通路，巨噬細(xì)胞增殖浸潤和肌成纖維細(xì)胞增殖在腎纖維化過程中起關(guān)鍵作用。腎纖維化包括腎間質(zhì)纖維化及腎小球硬化，各種炎癥及細(xì)胞因子在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中，相互作用，共同導(dǎo)致了腎纖維化的產(chǎn)生。因此，在組織學(xué)不可逆轉(zhuǎn)之前給予積極干預(yù)治療，可能阻斷或逆轉(zhuǎn)腎臟纖維化的發(fā)生及發(fā)展。最近研究發(fā)現(xiàn)，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)或血管緊張素II受體(AT1)阻斷藥(ARB)可通過降低血漿醛固酮水

2、平，發(fā)揮其靶器官的保護(hù)作用，但長期應(yīng)用，其作用不能持續(xù)，把這種現(xiàn)象稱為“醛固酮逃逸”，且隨治療時間的延長“醛固酮逃逸”現(xiàn)象的發(fā)生，導(dǎo)致其靶器官保護(hù)效應(yīng)逐漸消失，而此效應(yīng)在加用醛固酮受體拮抗劑后又可再次出現(xiàn)。螺內(nèi)酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)類似醛固酮，可與醛固酮競爭結(jié)合醛固酮受體，阻止醛固酮-受體復(fù)合物的形成，從而抑制醛固酮發(fā)揮生理作用。動物試驗亦發(fā)現(xiàn)，其可通過下調(diào)PAI-1、TGF-β1、MCP-1、IL-6、IL-1等，在疾病早期即可減少蛋白尿，改善

3、腎臟纖維化程度，進(jìn)而延緩慢性腎臟病的進(jìn)展，且其此種作用并不依賴于其對血壓的作用。本文擬采用5/6腎切除大鼠模型，給予螺內(nèi)酯進(jìn)行干預(yù)，觀察腎臟ACTA、TGF-β1、α-SMA的表達(dá)與腎功能及組織結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系，了解螺內(nèi)酯對以上指標(biāo)及腎功能的影響，探討其腎臟保護(hù)的機理，為臨床腎纖維化的防治提供理論依據(jù)。方法：選擇健康雄性SD大鼠72只(購自河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心)，體重180-200g，隨機分為假手術(shù)組(A組)，5/6腎切除組(B組)，

4、5/6腎切除+螺內(nèi)酯治療組(C組)，空白對照組(D組)每組各18只。每組于手術(shù)后第30天、60天、90天分批處死，(標(biāo)記為A30，A60，A90，其他組同此)。用1O％水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉，置于溫暖無菌手術(shù)臺，取右側(cè)臥位固定麻醉大鼠，左肋脊角入口，游離腎臟，游離腎上腺及腎上腺動脈，避免損傷腎上腺和腎上腺動脈，分別將左側(cè)腎臟上、下極各切除約1/3大小的腎臟，7d后行右側(cè)。腎臟切除術(shù)，其中A組也行兩次手術(shù)，但不切除腎臟，

5、開腹游離腎臟后即關(guān)腹。D組不行任何手術(shù)。術(shù)后大鼠單獨飼養(yǎng)3d，分組置飼養(yǎng)籠群養(yǎng)，開始進(jìn)行干預(yù)治療：A組和B組每天給予自來水灌胃，C組和D組，每天分別給予等量螺內(nèi)酯(20mg·kg-1·d-1)水提取液灌胃；大鼠自由飲水、進(jìn)食、末次術(shù)后30天、60天、90天每組分別隨機處死6只大鼠。處死前留24小時尿液、血液標(biāo)本，測定血肌酐及24小時尿蛋白定量。取殘腎固定于福爾馬林溶液中備用。行HE、Masson、PAS染色，觀察腎臟病理改變，并采用免疫

6、組織化學(xué)染色測定腎臟中ACTA、TGF-β1及α-SMA的表達(dá)，結(jié)果應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)半定量分析。 結(jié)果：1、病理改變：A組及D組大鼠腎臟組織無明顯病理改變。B、C組大鼠腎臟早期可見腎小球體積增大，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤，系膜增生，部分毛細(xì)血管袢與球囊粘連；后期可見腎小球中重度系膜增生，毛細(xì)血管袢受壓，腎小球硬化，腎小管萎縮，腎間質(zhì)纖維化。C組病變較同期B組明顯減輕。2、生化改變：血肌酐及24小時尿蛋白定量在A、D組無明顯變化。隨時間的

7、延長，B組呈進(jìn)行性升高，不同時間點組內(nèi)比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，較A、D組明顯升高(P＜0.05)。C組較同期B組均明顯降低(P＜0.05)，但仍較A、D組升高(P＜0.05)。3、免疫組化：B組腎小球和小管間質(zhì)區(qū)ACTA、TGF-β1及α-SMA陽性表達(dá)隨時間延長均呈進(jìn)行性增多，不同時間點組內(nèi)比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，與較A、D組表達(dá)明顯增多(P＜0.05)；C組腎臟ACTA、TGF-β1及α-SMA表達(dá)較同期B組明顯