蛭弧菌Bdh5221株理化特性和16Sr DNA序列分析及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的運(yùn)用研究.pdf

1、蛭弧菌是一種寄生性細(xì)菌，在自然條件下，除突變的宿主不依賴型蛭弧菌外(H-I)，其它的宿主依賴型(H-D)蛭弧菌生長(zhǎng)和繁殖都需要宿主菌的存在，使得研究蛭弧菌的許多工作受到宿主菌的影響。本實(shí)驗(yàn)使用一株已經(jīng)分離的海水蛭弧菌Bdh5221，在對(duì)其培養(yǎng)特性和噬菌譜研究的基礎(chǔ)和排除其宿主菌的干擾下，研究其生理生化特性、16srDNA序列以及在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的運(yùn)用，以期為水產(chǎn)動(dòng)物疾病控制提供新的思路和方法。現(xiàn)分別報(bào)道如下： 1.蛭弧菌Bdh522

2、1理化特性和16SrDNA序列分析研究：利用蛭弧Bdh5221能在70℃30min滅活的宿主菌上生長(zhǎng)的特點(diǎn)，對(duì)其理化特性、藥敏特性和16SrDNA序列進(jìn)行了相關(guān)分析。結(jié)果表明：該株蛭弧菌為革蘭氏陰性菌，呈桿狀、弧狀，一端有極長(zhǎng)的極生鞭毛，細(xì)菌大小在0.2～0.5×0.6～1.5μm左右；生化實(shí)驗(yàn)表明：Bdh5221明膠穿刺試驗(yàn)和接觸酶試驗(yàn)呈陽(yáng)性，氧化酶反應(yīng)呈陰性，對(duì)弧菌抑制劑O/129敏感；藥敏實(shí)驗(yàn)表明：此菌對(duì)新霉素、卡那霉素、恩諾沙星

3、敏感，對(duì)青霉素、磺胺嘧啶和萬古霉素不敏感；對(duì)其16srDNA序列的測(cè)定、分析表明，與其同源性最高的細(xì)菌是一株新發(fā)現(xiàn)的海洋新種細(xì)菌Kordiimonasgwangyangensis，同源性高達(dá)99％，而與其他蛭弧菌屬細(xì)菌的同源性從90％到70％不等，并針對(duì)其基因序列作了相關(guān)進(jìn)化分析。 2.研究養(yǎng)殖水環(huán)境因子NO3--N、NO2--N、NH4+-N、PO43--P和S2--等主要水質(zhì)因子對(duì)蛭弧菌海水菌株Bdh5221生長(zhǎng)的影響，考察

4、蛭弧菌Bdh5221在正常養(yǎng)殖水環(huán)境中的定植情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：NO3--N添加濃度在0～10mg/L之間、NH4+-N添加濃度在0～5mg/L之間，隨著濃度增高，NO3--N、NH4+-N對(duì)蛭弧菌Bdh5221的生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用；NO2--N濃度添加在0～0.5mg/L之間，隨著濃度增高，NO2--N對(duì)蛭弧菌Bdh5221的生長(zhǎng)有一定的抑制作用；PO43--P濃度在0～10mg/L之間、S2--濃度在0～5mg/L之間，未見其對(duì)蛭弧菌

5、Bdh5221的生長(zhǎng)有影響。 3.使用蛭弧菌Bdh5221作為飼料添加劑對(duì)銀鯽投喂的實(shí)驗(yàn)：以0，104cfu/g，107cfu/g飼料的濃度將蛭弧菌Bdh5221菌液噴灑于基礎(chǔ)料上投喂銀鯽(Carassiusauratusgibelio)，于第7，14，21，28d時(shí)檢測(cè)鯽魚腸道蛭弧菌數(shù)量的變化。在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組蛭弧菌數(shù)量基本達(dá)到穩(wěn)定(即28d)時(shí)，測(cè)定了蛭弧菌Bdh5221對(duì)銀鯽腸道菌群和血清中非特異性指標(biāo)的影響。結(jié)果顯示：104

6、cfu/g和107cfu/g添加組的大腸桿菌、氣單胞菌數(shù)量明顯少于對(duì)照組(P＜0.05)，而乳酸桿菌數(shù)量明顯大于對(duì)照組(P＜0.01)，雙歧桿菌數(shù)量有上升的趨勢(shì)，擬桿菌變化不明顯；非特性性免疫酶中除104cfu/g添加組的超氧化化物歧化酶變化不明顯外，其余各實(shí)驗(yàn)組溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶以及酚氧化酶在104cfu/g和107cfu/g添加組中顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)高于對(duì)照組。由此表明在飼料中蛭弧菌有改善銀鯽腸