NDRG2在胰島中的功能研究.pdf

1、人NDRG2基因由本課題組首先克隆并報(bào)道（GenBank檢索號(hào)：AF159092）。它定位于染色體14q11.2，編碼一個(gè)含有357個(gè)氨基酸殘基、分子量約為41kDa的蛋白質(zhì)。在研究Ndrg2的組織分布時(shí)，我們通過(guò)胰腺的免疫組化發(fā)現(xiàn)，Ndrg2特異性的表達(dá)于胰島中。由于胰島中有約60％－80％的細(xì)胞均為B細(xì)胞，這一發(fā)現(xiàn)提示特異性的表達(dá)于胰島中的Ndrg2可能與胰島B細(xì)胞的功能密切相關(guān)。由于胰島B細(xì)胞的主要功能是分泌胰島素，因此，我們的目

2、標(biāo)就是要探明Ndrg2的表達(dá)是否影響B(tài)細(xì)胞分泌胰島素。
　　為了探明NDRG2可能具有的功能，我們首先采用比較基因組學(xué)的方法對(duì)NDRG2進(jìn)行了分析。在分析中我們發(fā)現(xiàn)，胰島特異性轉(zhuǎn)錄因子INSM1和PAX6可能調(diào)控NDRG2的表達(dá)。這可能與NDRG2特異性表達(dá)于胰島當(dāng)中密切相關(guān)。另外，NDRG2在果蠅中的同源蛋白為MESK2，這一蛋白能抑制HNT蛋白發(fā)揮作用，由于HNT的同源蛋白為RREB1，其能增強(qiáng)正性調(diào)控因子Beta2/Neur

3、oD1胰島素的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。因而我們推測(cè)NDRG2可以負(fù)性調(diào)控胰島素基因的轉(zhuǎn)錄。
　　為了明確Ndrg2是否可以調(diào)控胰島素基因的轉(zhuǎn)錄，我們先后用糖與脂肪酸刺激?TC3細(xì)胞，然后檢測(cè)了胰島素的分泌水平與Ndrg2的表達(dá)水平之間的聯(lián)系。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，在Ndrg2mRNA表達(dá)增加時(shí)，胰島素mRNA表達(dá)下降。同時(shí)在過(guò)表達(dá)Ndrg2后，胰島素的分泌是減少的。這提示，Ndrg2的表達(dá)與胰島素的分泌是負(fù)相關(guān)的。但這一過(guò)程的機(jī)制是否如前所述，尚需

4、進(jìn)一步的研究和闡明。
　　我們也在動(dòng)物整體水平觀察了Ndrg2與胰島素分泌之間的聯(lián)系。我們進(jìn)行小鼠口服葡萄糖實(shí)驗(yàn)，于不同時(shí)間點(diǎn)收取血漿，用放免法測(cè)定胰島素含量，之后取小鼠胰腺，做免疫組化，觀察Ndrg2的表達(dá)變化情況。但我們并未觀察到Ndrg2與胰島素存在明顯的相關(guān)關(guān)系。
　　此外，為了研究Miz1的生物學(xué)功能，我們?cè)O(shè)計(jì)并構(gòu)建了Miz1的干擾載體。我們將構(gòu)建成功的siRNA表達(dá)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入人宮頸癌細(xì)胞HeLa,用RT-PC