NDRG2在多種胰島β細(xì)胞系的表達(dá)及其對(duì)胰島素合成的影響.pdf

1、目的：
　　NDRG2(N-Myc down-stream regulated gene)是N-Myc下游調(diào)節(jié)基因(NDRG)家族的重要成員之一,NDRG家族還包括NDRG1、NDRG3和NDRG4。目前研究發(fā)現(xiàn)該家族與細(xì)胞的增殖分化,應(yīng)激反應(yīng)及激素的代謝調(diào)節(jié)等方面相關(guān)。人源NDRG2是我校生化教研室首先發(fā)現(xiàn)并被命名的(AF159092)新基因,并被GenBank收錄,人與小鼠NDRG2同源性高達(dá)95％。前期研究發(fā)現(xiàn)NDRG2在胰

2、腺組織中主要分布于胰島β細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,且與胰島素的表達(dá)分布一致,為了驗(yàn)證NDRG2與胰島素之間的關(guān)系,我們從細(xì)胞及動(dòng)物水平進(jìn)行了研究,從而進(jìn)一步闡明其生物學(xué)功能和作用機(jī)制。
　　方法：
　?、偻ㄟ^間接免疫熒光和免疫組織化學(xué)的方法明確Ndrg2在四種胰島細(xì)胞系(MIN6、βTC3、βTC6、INS-1)及小鼠胰腺組織中的分布與定位;②通過免疫印跡及RT-PCR的方法檢測(cè)NDRG2在四種胰島細(xì)胞系(MIN6、βTC3、βTC6

3、、INS-1)中的表達(dá);③通過RNAi的方法下調(diào)NDRG2后,觀察INS-1,MIN6細(xì)胞中胰島素mRNA的變化;④通過間接免疫熒光的方法觀察siRNA下調(diào)NDRG2后,在MIN6細(xì)胞中NDRG2、PDX-1的表達(dá)與分布變化。
　　結(jié)果：
　?、貼DRG2與胰島素共同分布在胰島β細(xì)胞胞質(zhì)中。②NDRG2在四種胰島細(xì)胞系中都有表達(dá),其中在INS-1及MIN6細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)較高。③在INS-1和MIN6細(xì)胞中,下調(diào)NDRG2,通

4、過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)胰島素mRNA水平,發(fā)現(xiàn)NDRG2與胰島素mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。④在MIN6細(xì)胞中,下調(diào)NDRG2未能影響PDX-1的表達(dá)與活性,PDX-1的熒光強(qiáng)度和細(xì)胞定位沒有明顯變化。
　　結(jié)論：
　?、貼DRG2主要表達(dá)在胰島β細(xì)胞的胞質(zhì)中,在四種胰島細(xì)胞系及小鼠胰島細(xì)胞中NDRG2與胰島素分布情況一致。提示NDRG2在胰島β細(xì)胞中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。②在四種胰島細(xì)胞系中,在蛋白及mRNA水平均檢測(cè)到NDRG