不同糖濃度培養(yǎng)雪旺細(xì)胞NGF和CGT表達(dá)變化及Egb761干預(yù)后的變化.pdf

1、背景與目的
　　 雪旺細(xì)胞(Schwann Cell,SC)是周圍神經(jīng)系統(tǒng)的膠質(zhì)細(xì)胞,除了與周圍神經(jīng)的發(fā)生、發(fā)育、形態(tài)、功能等方面密切相關(guān)外,在周圍神經(jīng)損傷后的再生與修復(fù)過(guò)程中也起著非常重要的作用,SC還能分泌多種活性物質(zhì)誘導(dǎo)、刺激和調(diào)控軸突的再生和髓鞘的形成。
　　 神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)是最早發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子,也是迄今為止研究得最清楚的一個(gè)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。NGF在神經(jīng)元的發(fā)

2、育、軸突的生長(zhǎng)、遞質(zhì)的合成及細(xì)胞的凋亡等階段均起著重要的作用。當(dāng)外周神經(jīng)受損傷時(shí),SC成為其主要來(lái)源。
　　 半乳糖神經(jīng)酰胺轉(zhuǎn)移酶(Galactosylceramide transferase,CGT)是合成神經(jīng)髓鞘主要成份半乳糖神經(jīng)酰胺的限速酶,在髓鞘以及體外培養(yǎng)的SC中表達(dá)。CGT是微粒體酶,主要在神經(jīng)、腦、腎臟中表達(dá),它催化半乳糖轉(zhuǎn)移到神經(jīng)酰胺而合成半乳糖神經(jīng)酰胺(Galactosylceramide,GalC)。GalC

3、是髓鞘中最豐富的脂質(zhì)之一,在中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)中,占髓鞘干重的20％,對(duì)髓鞘的結(jié)構(gòu)和功能起重要作用,但其過(guò)度的表達(dá)可誘導(dǎo)SC的凋亡。
　　 銀杏葉提取物具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化,對(duì)缺血-缺氧性損傷、機(jī)械損傷的神經(jīng)元具有保護(hù)作用,并且具有抑制細(xì)胞凋亡的作用。
　　 目前,國(guó)內(nèi)對(duì)于髓鞘形成細(xì)胞SC的研究大多集中在組織工程方面的研究,而對(duì)于其本身分泌活性物質(zhì)對(duì)于周圍神經(jīng)的作用研究并不多見(jiàn)。不同濃度葡萄糖水平對(duì)SC所分泌的NGF及CGT

4、影響的研究頗少見(jiàn)及關(guān)于銀杏葉提取物在糖尿病周圍神經(jīng)保護(hù)方面的作用研究報(bào)道較少,特別是低糖對(duì)SC分泌的活性物質(zhì)的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)的目的就是為了觀察不同的糖濃度對(duì)SC NGF mRNA、CGTmRNA的影響及銀杏葉提取物干預(yù)所設(shè)定的低糖及商糖組SC NGF mRNA、CCT mRNA表達(dá)的變化。
　　 材料與方法
　　 1實(shí)驗(yàn)方法
　　 本實(shí)驗(yàn)首先將所培養(yǎng)的雪旺細(xì)胞分別于10mmol/L、25mmol/L、50

5、mmol/L糖濃度下培養(yǎng),采用RT-PCR技術(shù),分別于培養(yǎng)后72h對(duì)各組的NGF mRNA,CGT mRNA表達(dá)進(jìn)行測(cè)定。之后,用銀杏葉提取物Egb761分別干預(yù)10mmol/L、50mmol/L糖濃度培養(yǎng)的SC,分別與未用Egb761干預(yù)的10mmol/L,50mmol/L糖濃度組進(jìn)行比較,各組均培養(yǎng)72小時(shí),采用RT-PCR技術(shù),對(duì)各組的NGF及CGT基因表達(dá)進(jìn)行測(cè)定。
　　 2統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 采用SPSS10.0

6、統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。數(shù)據(jù)經(jīng)檢驗(yàn)符合正態(tài)分布、方差齊,兩組之間的比較用t檢驗(yàn),組間比較采用單因素方差分析(ANOVA),三組間的兩兩比較用LSD檢驗(yàn)。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1 SC細(xì)胞于不同的糖濃度培養(yǎng)過(guò)程中的形態(tài)學(xué)觀察
　　 倒置顯微鏡下觀察25mM糖濃度下細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形或多個(gè)細(xì)胞呈多角形連接在一起,類似成纖維細(xì)胞,細(xì)胞核位于細(xì)胞中間,呈圓形,1

7、0mM及50mM糖濃度下細(xì)胞成類圓形,細(xì)胞核不明顯。
　　 2不同糖濃度培養(yǎng)SC NGFmRNA、CGTmRNA表達(dá)的變化
　　 經(jīng)過(guò)掃描及統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),高糖及低糖時(shí)雪旺細(xì)胞CGT mRNA表達(dá)明顯增高,而NGF mRNA表達(dá)降低,組間進(jìn)行比較得出:高糖組、低糖組與正常糖濃度組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05；低糖與高糖組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。
　　 3 Egb761干預(yù)后NGF mRNA、CG

8、T mRNA表達(dá)的變化
　　 經(jīng)過(guò)掃描及統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)Egb761干預(yù)的高糖組與低糖組分別與空白對(duì)照組進(jìn)行比較,NGF mRNA的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),CGTmRNA表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>0.05。
　　 結(jié)論：
　　 1、本實(shí)驗(yàn)于低糖及高糖濃度培養(yǎng)SC,與正常糖濃度相比NGF mRNA的表達(dá)減少,CGT mRNA的表達(dá)增加,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示高糖及低糖均可能導(dǎo)致周圍神經(jīng)的損傷