MSP58在人肝癌中的表達(dá)研究.pdf

1、肝癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，現(xiàn)已成為我國(guó)第二位惡性腫瘤致死原因[1]。尋找在肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用的分子，進(jìn)而干預(yù)肝癌的惡性生物學(xué)行為，已經(jīng)成為該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。我們前期的研究利用我校自主研究發(fā)現(xiàn)的NDRG2抑癌基因?yàn)檎T餌，采用酵母雙雜交方法，發(fā)現(xiàn)了MSP58基因（58-kDamicrospheruleprotein）[2]，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，MSP58在人腦膠質(zhì)瘤中有較高水平的表達(dá)，其表達(dá)程度與腦膠質(zhì)瘤的病理惡性程度呈正相關(guān)[

2、3]。另有研究表明：MSP58蛋白可影響腫瘤細(xì)胞的增殖能力[4]，其表達(dá)程度具有明顯的細(xì)胞周期相關(guān)的特點(diǎn)；它在細(xì)胞中過(guò)表達(dá)可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的克隆形成能力，并使細(xì)胞呈現(xiàn)非錨著依賴(lài)生長(zhǎng)的惡性表型，且該蛋白可以與多種在腫瘤的發(fā)生及增殖過(guò)程中發(fā)揮重要作用的分子產(chǎn)生相互作用[5]。上述研究表明：MSP58基因是一個(gè)對(duì)腫瘤增殖有著重要作用的癌基因；對(duì)該基因表達(dá)的干預(yù)有望成為人工干預(yù)腫瘤發(fā)生發(fā)展的新靶點(diǎn)。目前，圍繞該基因的有關(guān)研究工作正逐步展開(kāi)，但其

3、在人肝癌細(xì)胞中表達(dá)方面的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究利用免疫組化、RT-PCR和Westernblot技術(shù)，分別對(duì)HHCC、HepG2肝癌細(xì)胞系和不同惡性程度肝癌組織中MSP58的mRNA水平及蛋白表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)，旨在闡明MSP58在人肝癌細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律。
　　實(shí)驗(yàn)一:MSP58基因在不同肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)研究
　　目的:探討MSP58在HHCC、HepG2肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)規(guī)律。方法:應(yīng)用HHCC，HepG2兩種肝癌細(xì)胞系

4、，采用半定量RT-PCR和Westernblot，探索MSP58基因在不同肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)差異；圖片結(jié)果應(yīng)用KDSID軟件進(jìn)行灰度掃描分析，統(tǒng)計(jì)方法采用方差分析，以P<0.05（顯著差異）定為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:細(xì)胞系檢測(cè)結(jié)果顯示，在人肝癌細(xì)胞系HHCC、HepG2中，MSP58在mRNA及蛋白水平均有表達(dá)，其表達(dá)量在這兩種細(xì)胞系中無(wú)顯著差異（P>0.05）。結(jié)論:MSP58在HHCC和HepG2肝癌細(xì)胞系中均有表達(dá)；其表達(dá)量在這兩種

5、細(xì)胞系中無(wú)顯著差異。
　　實(shí)驗(yàn)二:MSP58基因在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與定位研究
　　目的:研究在不同分化程度的肝細(xì)胞癌組織中MSP58蛋白的表達(dá)情況及其在癌細(xì)胞中的定位規(guī)律。方法:本實(shí)驗(yàn)隨機(jī)收集了100例已經(jīng)病理確診為肝細(xì)胞癌的癌組織標(biāo)本和30例正常肝組織標(biāo)本。以正常肝組織標(biāo)本作為對(duì)照組；按WHO的病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)將肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本分為3組，各組根據(jù)其分化級(jí)別分別命名為：高分化組（32例）、中分化組（53例）、低分化組（15例）。

6、所有標(biāo)本均經(jīng)10％福爾馬林液固定、石蠟包埋切片，然后進(jìn)行MSP58蛋白免疫組織化學(xué)染色和隨機(jī)圖像采集。圖片結(jié)果采用Imagepro-Plus軟件進(jìn)行測(cè)量分析，對(duì)各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽(yáng)性顆粒的平均光密度、陽(yáng)性面積率做單因素方差分析和q檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果:100例肝細(xì)胞癌組織中有83例MSP58蛋白免疫組化染色陽(yáng)性，檢出率達(dá)83％；對(duì)照組30例正常肝組織中有7例MSP58陽(yáng)性，檢出率23.3％