血管緊張素II誘導(dǎo)bFGF-mRNA在人肝癌細胞中的表達.pdf

1、目的:(1)探討血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對人肝癌HepG2細胞系中堿性成纖維生長因子(bFGF) mRNA表達的作用。(2)比較CCK-8法與BrdU-ELISA法檢測人肝癌HepG2細胞增殖的可靠性。
　　方法:(1)離體培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞，采取不同濃度的AngⅡ?qū)毎M行相應(yīng)藥物處理后收集不同作用時間的細胞進行檢測，實驗分組每組設(shè)3個對照組，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)及熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法，分

2、別檢測AngⅡ處理前后人肝癌HepG2細胞系中bFGF的表達情況，同時采用CCK-8法檢測AngⅡ?qū)θ烁伟〩epG2細胞增殖的影響。(2)待細胞貼壁生長融合度分別達60％及80％時，以10-7mol/L濃度AngⅡ刺激細胞增殖，24h后分別用CCK-8法和BrdU-ELISA法，以及免疫熒光染色方法檢測細胞增殖情況。
　　結(jié)果:(1) AngⅡ不僅能夠刺激人肝癌HepG2細胞增殖，同時還能上調(diào)HepG2細胞中bFGF mRNA的表

3、達(P＜0.01)，且藥物作用隨著作用時間及作用濃度的增加而增強，在當AngⅡ濃度為10-7mol/L，作用時間為48h時，這種促表達作用達到最高峰，且該作用可以被AngⅡ1型受體(AT1R)拮抗劑所拮抗。(2)細胞貼壁生長融合度達60％時CCK-8檢測組和BrdU-ELISA檢測組與各自的對照組比較，比值分別為1.30和1.59，檢測值近似;細胞貼壁生長融合度達80％時二者分別為1.02和1.40，免疫熒光結(jié)果顯示AngⅡ刺激組的增殖