miR-155在肝癌中的表達(dá)及其對肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響.pdf

1、目的：檢測miR-155在肝癌標(biāo)本及細(xì)胞系中的表達(dá)情況，探討miR-155在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的生物學(xué)功能，并探究其與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為肝癌的診治及預(yù)后判斷提供新的策略。
　　方法：1、用人肝癌細(xì)胞HepG2和HuH7和正常肝細(xì)胞HL-7702，并收集30例原發(fā)性肝癌癌組織標(biāo)本，癌旁組織，12例正常肝組織標(biāo)本，運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)檢測miR-155在肝癌組及正常對照組中的表達(dá)。2、由慢病毒介導(dǎo)將基因miR-155轉(zhuǎn)染至miR

2、-155表達(dá)量低的細(xì)胞株(HuH-7)中，將抑制劑 inhibitor（miR-155 inhibitor）轉(zhuǎn)染至表達(dá)量高的細(xì)胞株（HepG2）中，通過MTT檢測細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞周期變化，以及應(yīng)用劃痕愈合試驗(yàn)、Transwell試驗(yàn)了解其對細(xì)胞遷移、侵襲的影響。3、通過qRT-PCR技術(shù)檢測上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）表型相關(guān)因子基因的表達(dá)及Western blot檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)，分析miR-155與EMT的關(guān)系。4

3、、通過qRT-PCR分析miR-155與腫瘤大小及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系，了解其對原發(fā)性肝癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的影響。
　　結(jié)果：1、miR-155在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯高于對照組，其中HepG2細(xì)胞株表達(dá)量較高，HuH7細(xì)胞株表達(dá)量較低，miR-155在肝癌組織中的表達(dá)量明顯高于癌旁組織和正常組織（P<0.05）。2、HuH7細(xì)胞株在轉(zhuǎn)染miR-155后細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期變化不明顯，細(xì)胞的遷移及侵襲能力增強(qiáng)，轉(zhuǎn)染miR-155 in

4、hibitor至HepG2細(xì)胞株后，細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期變化也不明顯，而細(xì)胞的遷移及侵襲能力減弱。3、HuH7細(xì)胞株在轉(zhuǎn)染miR-155后上皮表型CDH1的mRNA及蛋白表達(dá)減少，而間質(zhì)表型snai1和zeb1的mRNA及蛋白表達(dá)增加。HepG2細(xì)胞株在轉(zhuǎn)染miR-155 inhibitor后，呈現(xiàn)出相反的結(jié)果。4、臨床統(tǒng)計分析miR-155與肝癌的大小無關(guān)，與有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)表明 miR-155在肝癌細(xì)胞中