磁性納米顆粒共聚合漢黃芩素在非霍奇金淋巴瘤治療中的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　通過共聚合效應(yīng)構(gòu)建漢黃芩素-磁性四氧化三鐵納米顆粒(Wogonin-loadedmagnetic nanoparticles of magnetite，Wog-MNPs-Fe3O4)給藥體系，并研究其應(yīng)用于淋巴瘤治療的可能性。
　　方法：
　　(1)共沉淀法合成檸檬酸修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒(citric acid-modifiedmagnetic nanoparticles of magnetite，

2、CA-MNPs-Fe3O4)；
　　(2)透射電子顯微鏡(transmission electron microscopy，TEM)對CA-MNPs-Fe3O4的外貌及粒徑分布進(jìn)行表征；
　　(3)傅立葉紅外光譜儀(Fourier transform infrared spectroscopy，F(xiàn)T-IR)對檸檬酸(citric acid，CA)修飾前后的四氧化三鐵磁性納米顆粒(magnetic nanoparticleso

3、f magnetite，MNPs-Fe3O4)表面功能團(tuán)的變化進(jìn)行表征；
　　(4)差示掃描熱量儀(differential scanning calorimeter，DSC)對CA-MNPs-Fe3O4的組份及熱穩(wěn)定性進(jìn)行表征；
　　(5)Zeta電位儀對CA修飾前后MNPs-Fe3O4的電位及物理穩(wěn)定性進(jìn)行表征；
　　(6)光子相關(guān)光譜法(photon correlation spectroscopy，PSC)對C

4、A-MNPs-Fe3O4水和動(dòng)力學(xué)半徑及多分散系數(shù)(polydispersity index，PI)進(jìn)行表征；
　　(7)TEM從細(xì)胞形態(tài)學(xué)對CA-MNPs-Fe3O4的生物相容性進(jìn)行評估；
　　(8)噻唑藍(lán)比色(methyl thiazolyl tetrazoliym，MTT)法對CA-MNPs-Fe3O4的細(xì)胞相容性進(jìn)行評估；
　　(9)通過共聚合效應(yīng)構(gòu)建Wog-MNPs-Fe3O4給藥體系；
　　(10)M

5、TT法檢測Wogonin和Wog-MNPs-Fe3O4對Raji細(xì)胞生長的影響；
　　(11)流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)法檢測Raji細(xì)胞凋亡率；
　　(12)4'，6二脒基-2-苯吲哚(4'，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)染色法檢測Raji細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；
　　(13)FCM檢測Raji細(xì)胞周期分布；
　　(14)蛋白質(zhì)印跡法(western blot)

6、初步探究Wogonin及Wog-MNPs-Fe3O4影響Raji細(xì)胞的可能分子學(xué)機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　(1)制備的CA-MNPs-Fe3O4在溶液中分散更均勻，穩(wěn)定性更好；
　　(2)TEM結(jié)果示：CA-MNPs-Fe3O4形貌為球型或近似球型，平均粒徑為18 nm；
　　(3)FT-IR圖譜示：CA通過羧基和MNPs-Fe3O4表面結(jié)合；
　　(4)DSC圖譜示：CA以羧酸鹽的形式與MNPs-Fe3O4

7、表面結(jié)合且具有良好的熱穩(wěn)定性；
　　(5)Zeta電位結(jié)果示：MNPs-Fe3O4(17.5±0.40 mV)，CA-MNPs-Fe3O4(-44.63±0.74)，說明CA-MNPs-Fe3O4表面有較多的羧基基團(tuán)且經(jīng)CA修飾后納米顆粒穩(wěn)定性增強(qiáng)；
　　(6)在水溶液中CA-MNPs-Fe3O4形成的分散體系穩(wěn)定，其平均水合動(dòng)力學(xué)半徑為38.9±1.2 nm，PI為0.293±0.007；
　　(7)TEM結(jié)果顯示高

8、濃度CA-MNPs-Fe3O4僅使納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)積聚成團(tuán)而并未影響細(xì)胞正常形態(tài)及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)各細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)；
　　(8)當(dāng)CA-MNPs-Fe3O4作用于K562、K562/AO2及Raji細(xì)胞時(shí)，其對這三株細(xì)胞的毒性作用較弱，濃度大至80 mg/L時(shí)，細(xì)胞生存率仍保持在95％以上；
　　(9)CA-MNPs-Fe3O4能明顯改善Wogonin的水溶性；
　　(10)Wogonin和Wog-MNPs-Fe3O4對Raji

9、細(xì)胞有生長抑制作用，且具有濃度依賴性和時(shí)間依賴性；
　　(11)Wogonin及Wog-MNPs-Fe3O4均能誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡，且呈現(xiàn)劑量依賴性。與Wogonin相比，Wog-MNPs-Fe3O4誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡更顯著；
　　(12)DAPI染色顯示經(jīng)Wogonin及Wog-MNPs-Fe3O4干預(yù)的Raji細(xì)胞可見染色質(zhì)濃集、空泡化、新月形、凋亡小體、細(xì)胞核碎裂呈現(xiàn)碎片狀非均質(zhì)的增強(qiáng)熒光等典型的凋亡細(xì)胞核熒光改變

10、；
　　(13)Wogonin、CA-MNPs-Fe3O4及Wog-MNPs-Fe3O4均能誘導(dǎo)Raji細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯；
　　(14)Wogonin及Wog-MNPs-Fe3O4均能誘導(dǎo)Raji細(xì)胞caspase3和caspase8蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.05)，survivin蛋白表達(dá)水平下調(diào)且Wog-MNPs-Fe3O4更顯著。才外，Wog-MNPs-Fe3O4能誘導(dǎo)Raji細(xì)胞cyclin E蛋白水平明顯下