中藥復(fù)方肺康靈對肺間質(zhì)纖維化的改善作用及其機(jī)制研究.pdf

1、肺間質(zhì)纖維化(Pulmonary Interstitial Fibrosis，PIF)是一組病因各異且具共同病理特征的一類肺破壞性疾病，其典型的病理特征是成纖維細(xì)胞過度增生、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白沉積沉積、肺組織結(jié)構(gòu)變形、最終肺功能衰竭。近年，隨著社會環(huán)境特別是大氣污染的加重，其發(fā)病率逐年上升，但是由于缺乏有效的治療策略，肺間質(zhì)纖維化病人5年生存率明顯低于50％。因此，探索有效治療PIF的藥物是當(dāng)今醫(yī)藥界研究的熱點(diǎn)。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對PIF發(fā)

2、病機(jī)理的研究表明，肺間質(zhì)纖維化形成與TGF-β的表達(dá)及活性失控、Th1/Th2型細(xì)胞反應(yīng)失衡、CD40/CD40配體(以下簡稱CD40/CD40L)系統(tǒng)所致的系列細(xì)胞反應(yīng)密切相關(guān)。上述研究表明，肺間質(zhì)纖維化是一個(gè)多因素誘發(fā)的疾病，因此，靶向多個(gè)靶點(diǎn)的治療策略成為目前治療肺間質(zhì)纖維化的熱點(diǎn)方向。 中藥是我國重要資源寶庫，依據(jù)中醫(yī)理論，通過近10萬種復(fù)方倡導(dǎo)的基于中藥復(fù)方多組分物質(zhì)基礎(chǔ)的聯(lián)合療法已有兩干五百年的歷史。采用中藥復(fù)方對P

3、IF進(jìn)行多靶點(diǎn)的聯(lián)合治療可能會取得較好的療效。但是大多數(shù)中藥復(fù)方的有效成分尚不明了、作用機(jī)理尚待探究，限制其推廣應(yīng)用。因此，利用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段，結(jié)合多學(xué)科研究方法，探索中藥復(fù)方的有效成分和作用機(jī)制，成為中藥復(fù)方科學(xué)使用的必要條件。 肺康靈是依據(jù)中醫(yī)傳統(tǒng)理論組建的中藥復(fù)方，在臨床進(jìn)行了基于病癥的療效觀察，發(fā)現(xiàn)肺康靈對肺間質(zhì)纖維化各綜合癥狀均有較好的改善作用，其中58例臨床病人療效觀察，總有效率達(dá)致68％。為了進(jìn)一步闡明肺康靈中藥

4、復(fù)方的有效成分、探明其具體作用機(jī)制，本文在兩項(xiàng)國家自然基金項(xiàng)目的支持下，利用利用現(xiàn)代生物技術(shù)、蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)及現(xiàn)代藥理學(xué)技術(shù)，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對肺間質(zhì)纖維化的認(rèn)識，對中藥復(fù)方的作用機(jī)制和分子靶點(diǎn)進(jìn)行了深入系統(tǒng)的研究。 在體外，采用血清藥理學(xué)方法，以肺巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清、TGF-β作為誘導(dǎo)劑，采用MTT法，流式細(xì)胞術(shù)，激光共聚焦顯微鏡等多種方法，在體外觀察了肺康靈對肺巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清、TGF-β誘導(dǎo)的human embryo pulmo

5、nary fibroblast(HEPF)細(xì)胞增殖的抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肺康靈可以明顯抑制肺巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清、TGF-β誘導(dǎo)的HEPF細(xì)胞的增殖。進(jìn)一步研究表明肺康靈可以明顯提高Ⅰ型細(xì)胞因子生成，而減少Ⅱ型細(xì)胞因子含量，減少炎性因子產(chǎn)生，從而發(fā)揮肺康靈的抗肺纖維化作用。體內(nèi)通過氣管注射博來霉素復(fù)制大鼠肺纖維化模型，肺康靈能較明顯的抑制肺泡巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的作用。組織病理形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示肺康靈能夠減輕肺炎癥細(xì)胞浸潤，減少成纖維細(xì)胞增殖及

6、胞外基質(zhì)沉積，從而減弱肺纖維化的程度。提示，肺康靈對肺纖維化具有明顯的治療作用。 進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，肺康靈抗肺間質(zhì)纖維化的主要活性成分為多糖類組分。為了深入探討其作用機(jī)制，本文整合親和層析、質(zhì)譜、SDS-PAGE、western blot、免疫沉淀、共定位、SPR等方法，結(jié)合復(fù)合多糖生物芯片等現(xiàn)代生物、蛋白質(zhì)組及藥理學(xué)技術(shù)體系，發(fā)現(xiàn)肺康靈的主要活性組分多糖能同時(shí)靶向TGF-β和RIP1蛋白發(fā)揮其抑制TGF-β及CD40系統(tǒng)的相關(guān)信