磷脂酶A-,2-活性與肺間質(zhì)纖維化關(guān)系的研究及白藜蘆醇苷對大鼠肺間質(zhì)纖維化的防治作用.pdf

1、本研究通過建立博來霉素(BLM)誘導(dǎo)的大鼠肺間質(zhì)纖維化的動(dòng)物模型，探討磷脂酶A2(phospholipaseA2，PLA2)活性及其相關(guān)炎癥介質(zhì)在肺間質(zhì)纖維化形成中的作用。分別給予3種劑量的白藜蘆醇苷(polydatin，PD)，觀察PD對大鼠肺間質(zhì)纖維化的防治作用并探討其可能的作用機(jī)理。 [方法]選用160只3月齡Spraque-Dawley健康大鼠，體重240～280g，雌雄各半。隨機(jī)分為5組，每組32只，分別為A組：正常對

2、照組(腹腔注射生理鹽水1ml·d-1)；B組：肺纖維化模型組(造模前腹腔注射生理鹽水1ml·d-1)；C組：PD治療低劑量組(造模前腹腔注射PD10mg·kg-1)；D組：PD治療中劑量組(造模前腹腔注射PD20mg·kg-1)；E組：PD治療高劑量組(造模前腹腔注射PD40mg·kg-1)。每組再隨機(jī)分為3、7、14、28d4小組，每小組8只。采用氣管內(nèi)注射BLM制備大鼠肺間質(zhì)纖維化模型，各治療組連續(xù)給予PD直至處死日。取大鼠右肺組織

3、制備病理切片，行HE染色，光鏡下觀察各組各時(shí)間點(diǎn)肺組織形態(tài)學(xué)變化；采用堿水解法測定肺組織勻漿中羥脯氨酸(HyP)含量；酸式滴定法檢測肺組織勻漿中PLA2活性；用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的前列腺素E2(PGE2)、白三烯C4(LTC4)及轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)含量。 [結(jié)果] 1BLM誘導(dǎo)的大鼠肺間質(zhì)纖維化模型的建立模型組病理組織形態(tài)學(xué)可見：第3d大鼠肺泡壁水腫，肺

4、間質(zhì)沿支氣管走行有大量炎性細(xì)胞浸潤；第7d肺泡間隔水腫明顯，間質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞繼續(xù)增多，開始出現(xiàn)成纖維細(xì)胞；第14～28d，肺間質(zhì)成纖維細(xì)胞增多，大量膠原沉積在新生的毛細(xì)血管周圍，大量肺泡結(jié)構(gòu)萎陷、破壞，間質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞逐漸向以淋巴細(xì)胞浸潤為主。符合大鼠肺間質(zhì)纖維化的基本病理特征。 2PLA2及其相關(guān)炎癥介質(zhì)PGE2、LTC4和免疫因子TGF-β1與肺間質(zhì)纖維化的關(guān)系大鼠氣管內(nèi)注射BLM后第3、7、14、28d，模型組肺組織勻漿中PL

5、A2活性、BALF中的PGE2、LTC4和TGF-β1含量均較正常對照組顯著增高(P＜0.01)，肺組織HyP含量于第7d開始較正常對照組增高(P＜0.05)，第28d達(dá)最高峰。相關(guān)性分析顯示，PLA2與LTC4、PGE2，TGF-β1及HyP之間均存在正相關(guān)；LTC4、PGE2及TGF-β13者之間也有一定的相關(guān)性。 3PD對肺間質(zhì)纖維化的防治作用與肺間質(zhì)纖維化模型組比較，3種劑量的PD(10mg·kg-1·d-1、20mg·

6、kg-1·d-1、40mg·kg-1·d-1)均可降低大鼠肺組織勻漿中PLA2活性和HyP含量及BALF中的PGE2、LTC4和TGF-β1含量(P＜0.05)，其中高劑量組(E組)低于中劑量組(D組)，中劑量組低于低劑量組(C組)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，但上述觀察指標(biāo)仍高于正常對照組(P＜0.01)。病理組織形態(tài)學(xué)提示，PD各治療組肺泡炎及肺纖維化程度較輕，無嚴(yán)重肺泡炎及肺纖維化發(fā)生。 [結(jié)論] 1肺纖維化

7、模型組的PLA2活性、PGE2、LTC4、TGF-β1含量均較正常對照組明顯增高，說明PLA2、其相關(guān)炎癥介質(zhì)PGE2、LTC4及TGF-β1均參與了肺間質(zhì)纖維化過程。 2PLA2與LTC4、PGE2、TGF-β1及HyP之間均存在正相關(guān)。LTC4、PGE2及TGF-β13者之間也有一定的相關(guān)性。提示PLA2可能從炎癥和免疫兩方面參與肺間質(zhì)纖維化的形成。 3PD具有抑制肺間質(zhì)纖維化的作用，但不能完全阻止肺間質(zhì)纖維化的進(jìn)展