ADSCs的海藻酸鈣-骨粉微膠珠在轉(zhuǎn)瓶中的骨向分化.pdf

1、自體骨移植和異體骨嫁接技術(shù)是治療常見骨骼類疾病的傳統(tǒng)方法，但由于這兩種方法存在免疫排斥、受供體來源限制、患者痛苦大等缺點，骨組織工程受到廣泛的關(guān)注。不同原因造成的骨缺損，其部位和形態(tài)差別很大，海藻酸鈣微膠珠能夠較好的適應(yīng)不同形態(tài)的要求。因此，本課題將ADSCs的微膠珠置于轉(zhuǎn)瓶的三維動態(tài)環(huán)境中誘導(dǎo)分化，探討ADSCs在微膠珠內(nèi)的骨向分化。
　　本文通過綜合考慮海藻酸鈉溶液的濃度、氯化鈣溶液的濃度及骨粉的密度對海藻酸鈣/骨粉微膠珠機械

2、強度及傳質(zhì)性能的影響，制備用于ADSCs的體外增殖分化的最優(yōu)化的微膠珠。正交試驗結(jié)果顯示，海藻酸鈉溶液的濃度是決定微膠珠機械強度和傳質(zhì)性能的決定因素，其次為氯化鈣溶液的濃度，骨粉密度的影響最小。當(dāng)海藻酸鈉溶液的濃度為2.5％，氯化鈣濃度為4％，骨粉密度為5.0 mg/mL時微膠珠的性能最好，確定為最佳制備工藝。死活染色、細胞生長曲線及成骨誘導(dǎo)檢測表明實驗所用的ADSCs生長狀態(tài)及細胞活性良好并且具有成骨分化潛能。微膠珠內(nèi)ADSCs死活染

3、色及細胞增殖實驗顯示，海藻酸鈣/骨粉微膠珠生物相容性良好，ADSCs能夠保持良好的生長狀態(tài)及細胞活性并且最佳包埋密度為5×106 cells/mL。ADSCs在微膠珠內(nèi)骨向分化過程中時，實驗組和兩組對照組同時進行，其中實驗組為轉(zhuǎn)瓶中ADSCs在海藻酸鈣/骨粉微膠珠內(nèi)的成骨誘導(dǎo)，對照組Ⅰ為靜態(tài)下ADSCs在海藻酸鈣/骨粉微膠珠內(nèi)的成骨誘導(dǎo)，對照組Ⅱ為靜態(tài)下ADSCs在海藻酸鈣微膠珠內(nèi)的成骨誘導(dǎo)。微膠珠內(nèi)的ADSCs成骨誘導(dǎo)14 d后，分別

4、采用堿性磷酸酶(ALP)-微量酶標(biāo)法和ALP染液定量和定性檢測培養(yǎng)液中堿性磷酸酶的含量，誘導(dǎo)21 d后分別進行茜素紅染色和von-Kossa染色，檢測ADSCs內(nèi)礦化結(jié)節(jié)的情況。成骨誘導(dǎo)的前2d，三組實驗均未檢測到培養(yǎng)液中的堿性磷酸酶，從第3d開始，三組實驗的培養(yǎng)液中開始逐漸檢測到ALP，基本呈上升趨勢。實驗組培養(yǎng)液中的ALP含量最高，對照組Ⅰ ALP含量其次，對照組Ⅱ ALP的含量最低。誘導(dǎo)培養(yǎng)至第14d，細胞內(nèi)開始生成礦化結(jié)節(jié)，AL