RNAi敲除Ufd1基因表達(dá)逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW1116-HCPT對(duì)羥基喜樹堿耐受的研究.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文RNAi敲除Ufd1基因表達(dá)逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW1116HCPT對(duì)羥基喜樹堿耐受的研究姓名：陳翔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師：冉志華20090401上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文摘要摘要(第二部分)目的：明確敲除Ufdl能否逆轉(zhuǎn)SWI116／HCPT對(duì)羥基喜樹堿的耐受性。方法：分別用噻唑藍(lán)(MTT)行體外藥物敏感實(shí)驗(yàn)比較干擾組和對(duì)照組細(xì)胞對(duì)羥基喜樹堿的敏感性；比色法比較在羥基喜樹堿作用下干擾組細(xì)

2、胞和對(duì)照組細(xì)胞caspase3的活性；流式細(xì)胞分析羥基喜樹堿對(duì)兩組細(xì)胞增殖周期的影響。并用Westernblot檢測(cè)在羥基喜樹堿作用下，兩組細(xì)胞的pJNK、pAkt和p53的表達(dá)情況和細(xì)胞內(nèi)泛素化蛋白質(zhì)的儲(chǔ)留情況。結(jié)果：體外藥物敏感實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示干擾組細(xì)胞對(duì)羥基喜樹堿的敏感性遠(yuǎn)高于對(duì)照組伊001)，Caspase3活性測(cè)定結(jié)果提示在相同濃度和接觸時(shí)間的羥基喜樹堿作用下，干擾組細(xì)胞Caspase3活性均高于對(duì)照組(PO01)，提示敲除Ufd

3、l能夠強(qiáng)化羥基喜樹堿誘導(dǎo)SWlll6／HCPT的Caspase3活化而逆轉(zhuǎn)其對(duì)羥基喜樹堿的耐受性。流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示在羥基喜樹堿作用下干擾組和對(duì)照組細(xì)胞的增殖都出現(xiàn)了S期阻滯，但是干擾組細(xì)胞的S期阻滯現(xiàn)象較對(duì)照組更為顯著(p005)。Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)干擾組細(xì)胞的PJNK、p53和泛素表達(dá)水平高于對(duì)照組，兩組細(xì)胞均未檢測(cè)到pAkt的表達(dá)。結(jié)論：敲除Ufdl能夠逆轉(zhuǎn)SWlll6／HCPT對(duì)羥基喜樹堿的耐藥性，上調(diào)p53的表達(dá)