羊草(Leymus chinensis)轉(zhuǎn)CMO基因的研究.pdf

1、羊草（Leymus chinensis）是分布于我國(guó)北方天然草地面積較廣、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高而且較耐鹽堿的最優(yōu)良的禾本科牧草，是經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的草原類型。羊草具有耐寒、耐旱、耐濕、耐踐踏、耐土壤瘠薄和一定的耐鹽堿能力，適應(yīng)范圍很廣。但是由于近年來人們的過度開發(fā)和利用，造成天然羊草草原的退化。為了保護(hù)羊草資源，提高草地生產(chǎn)力，探索改良鹽堿化草地的技術(shù)和途徑已成為必然趨勢(shì)，如何利用大面積鹽堿地是我們?nèi)祟惼惹行枰鉀Q的問題。 羊草是建立人工

2、草地和治理鹽堿化土地的理想草種，雖具有一定的抗鹽堿能力，一直未能很好地發(fā)揮改良鹽堿地的作用。根據(jù)羊草生育規(guī)律及生物學(xué)特性，進(jìn)行栽培、利用，充分發(fā)揮羊草具有的耐鹽堿能力，不斷培育出高度耐鹽堿的羊革新品種，才是開發(fā)利用羊草草地資源的根本對(duì)策。 采用傳統(tǒng)的育種方法，選育耐鹽品種極為緩慢。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們可以用基因工程技術(shù)提高植物的耐鹽堿性。提高植物抗鹽性最有效的方法就是充分利用抗鹽基因，培育新的高抗鹽品種。 本研

3、究采用羊草愈傷組織為受體材料，對(duì)膽堿單加氧酶基因（CMO）的無選擇標(biāo)記表達(dá)載體轉(zhuǎn)化羊革進(jìn)行了研究，鑒定了羊草愈傷組織及再生苗耐鹽堿敏感性，確定羊草愈傷組織及再生苗耐鹽堿的臨界濃度，對(duì)已轉(zhuǎn)化的愈傷組織及再生苗進(jìn)行篩選和幾項(xiàng)重要生理指標(biāo)的鑒定。評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)CMO基因羊草耐鹽堿的能力。取得的主要研究結(jié)果如下： 1．利用基因槍轉(zhuǎn)化法將CMO基因轉(zhuǎn)入羊草，獲得了轉(zhuǎn)基因植株。 將轉(zhuǎn)化的愈傷組織進(jìn)行分化出苗后進(jìn)行PCR檢測(cè)和Southern

4、雜交檢測(cè)，證明外源基因已整合到羊草基因組中。 2．羊草愈傷組織耐鹽敏感性測(cè)定 綜合增重指數(shù)和愈傷組織生長(zhǎng)狀態(tài)兩種因素考慮，羊草愈傷組織對(duì)堿性鹽（NaHCO3與Na2CO3）的最大耐受強(qiáng)度為4mmol/L。 3．轉(zhuǎn)CMO基因羊草對(duì)堿性鹽的耐受強(qiáng)度 普通羊草植株對(duì)堿性鹽的可耐最大強(qiáng)度為150mmoL/L，而轉(zhuǎn)基因植株在200mmoL/L以上濃度堿性鹽脅迫下還有半數(shù)左右生長(zhǎng)良好。說明轉(zhuǎn)入CMO基因后的羊草植株的