基于NF-KB通路抑制的姜黃素抗胃癌機理的研究.pdf

1、目的：
　　1.觀察姜黃素（curcumin）刺激胃癌細胞SGC7901后，NF-κB通路相關因子IκBα在轉錄水平（mRNA）、蛋白水平的表達及IκBα磷酸化變化，NF-κB與其靶序列結合能力及其核定位的影響，初步探討姜黃素對胃癌細胞SGC7901中NF-κB通路的影響。
　　2.觀察姜黃素（curcumin）對胃癌細胞SGC7901誘導后，胃癌細胞SGC7901中IL-1、IL-2、IL-4和Lin-28等因子在轉錄水平

2、及蛋白水平的表達變化，從細胞微炎癥角度探討姜黃素（curcumin）抑制由LPS刺激胃癌細胞SGC7901引起的炎癥。
　　3.觀察姜黃素（curcumin）對胃癌細胞SGC7901及采用RNA干擾（RNAi）方法沉默let-7a的胃癌細胞SGC7901（胃癌細胞SGC7901-let7a-）誘導后，胃癌細胞SGC7901中小分子RNA let-7a表達量的變化，探討姜黃素誘導與let-7a表達量變化之間的關系。
　　4.觀

3、察姜黃素（curcumin）刺激胃癌細胞 SGC7901及胃癌細胞SGC7901-let7a-后，胃癌細胞SGC7901及胃癌細胞SGC7901-let7a-凋亡及集落形成能力的變化，姜黃素是否通過增加let7a的方式來發(fā)揮其抗癌作用。
　　方法：
　　1.胃癌細胞SGC7901先用不同濃度的姜黃素[0μmol/L(normal control),10μmol/L,30μmol/L,50μmol/L]孵育10小時，然后用0.

4、1μg/ml LPS處理1h，通過半定量逆轉錄PCR檢測IκBα的mRNA表達水平，Western Blotting檢測IκBα的蛋白表達水平及其磷酸化，電泳遷移率實驗(EMSA）檢測核因子-κB(NF-κB)與其靶序列結合能力。
　　2.胃癌細胞SGC7901先用不同濃度的姜黃素[0μmol/L(normal control),10μmol/L,30μmol/L,50μmol/L]孵育10小時，然后用0.1μg/ml LPS處理

5、1h，通過半定量逆轉錄PCR檢測IL-1、IL-2、IL-4 and Lin-28等的mRNA表達水平，Western Blotting檢測IL-1、IL-2、IL-4and Lin-28等的蛋白表達水平。
　　3.由以上結果得出最適姜黃素濃度處理胃癌細胞SGC7901與胃癌細胞SGC7901-let7a-10小時，然后用0.1μg/mlLPS處理1h，通過Northern Blotting分析let-7a的表達量變化。
　

6、　4.用不同濃度姜黃素[0μmol/L(normal control),10μmol/L,50μmol/L]處理胃癌細胞SGC7901與胃癌細胞SGC7901-let7a-48小時，流式細胞術分析細胞凋亡及細胞集落形成刺激實驗檢測let-7a沉默對胃癌細胞SGC7901的影響。
　　結果：
　　1.姜黃素可以顯著地增加IκBα轉錄水平。結果表明LPS誘導1小時就可顯著降低IκBα的水平，而30μM的姜黃素可以通過增加IκBα

7、表達水平、抑制IκBα磷酸化來阻滯LPS介導的IκBα水平下降。蛋白雜交分析和免疫組化研究同樣表明，姜黃素可以阻止LPS介導的p50/p65轉核作用。0.1μg/mL LPS可以顯著增加細胞核蛋白對于NF-κB DNA的結合。添加姜黃素處理后，LPS誘導的細胞核蛋白對于NF-κB DNA的結合效率明顯降低。
　　2.實驗采用半定量逆轉錄PCR和蛋白雜交等方法檢測相關轉錄因子的水平。本定量PCR的檢測結果表明，LPS能顯著增加IL-

8、1、IL-2、L-4、STAT3和Lin-28的轉錄水平，而姜黃素可以以濃度依賴的方式，有效的降低 LPS誘導的IL-1、L-4、TNFα、STAT3和Lin-28的轉錄水平，但對IL-2轉錄水平的影響不顯著。蛋白雜交的結果同樣顯示，姜黃素能降低胃癌細胞SGC7901中這些癌癥潛在激活因子（IL-1、IL-4、TNFα、STAT3和Lin-28）的蛋白水平。
　　3.Northern雜交結果顯示，反義RNA可以抑制let7a的表達

9、。通過流式細胞分析發(fā)現(xiàn)，姜黃素誘導的細胞凋亡，隨著細胞內(nèi)let7a的表達抑制而降低。這表明let7a在姜黃素抗癌活性中起到重要的作用。
　　結論：
　　姜黃素可以抑制NF-κB通路的激活。姜黃素抑制NF-κB通路，主要是通過特異性的激活表達，抑制IKK途徑降低IκBα的降解，達到抑制NF-κB轉移入細胞核的目的。抑制NF-κB通路在一定程度上可以達到抑制炎癥和癌癥發(fā)生的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素可以通過這種作用而達到抑制胃癌的