宮內(nèi)感染致新生鼠支氣管肺發(fā)育不良中NF-κBp65、TNF-a的變化及地塞米松的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的:
　　目前認(rèn)為宮內(nèi)感染與新生兒支氣管肺發(fā)育不良關(guān)系密切[1]。本研究通過(guò)給孕鼠腹腔內(nèi)注射脂多糖(LPS)建立宮內(nèi)感染模型，研究宮內(nèi)感染致新生鼠支氣管肺發(fā)育不良肺組織中NF-κ Bp65、TNF-α的表達(dá)變化，探討地塞米松對(duì)宮內(nèi)感染致新生鼠支氣管肺發(fā)育不良的干預(yù)效應(yīng)。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)分組:將30只妊娠第17d的孕鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組(NS組)、宮內(nèi)感染組（LPS組）和地塞米松干預(yù)組（DEX組），每組各

2、10只。LPS組于妊娠第17、18d連續(xù)2天腹腔內(nèi)注射脂多糖350μ g/kg; DEX組于妊娠第17、18d連續(xù)2天腹腔內(nèi)注射脂多糖350μ g/kg，注射脂多糖1h后腹腔內(nèi)注射地塞米松0.5mg/kg; NS組于相同妊娠時(shí)間點(diǎn)腹腔注射等容積的生理鹽水。
　　2.標(biāo)本收集:造模后分別從三組隨機(jī)取出2只孕鼠處死，取出胎盤(pán)、子宮置于4％中性甲醛中固定，用于HE染色。將自然分娩的新生鼠按照生后第1d、3d、7d、14d四個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別稱

3、體重后斷頭處死，迅速開(kāi)胸取出肺組織，并用生理鹽水洗凈，置于濾紙吸干肺組織表面水分后稱重，然后將肺組織置于4％中性甲醛中固定后石蠟包埋，用于HE和免疫組化染色。
　　3.實(shí)驗(yàn)方法:應(yīng)用HE染色觀察各組孕鼠子宮、胎盤(pán)的病理變化特點(diǎn);檢測(cè)三組新生大鼠的體重、肺重、計(jì)算肺指數(shù)（肺重/體重）;應(yīng)用HE染色觀察各組新生鼠肺組織病理變化特點(diǎn);顯微鏡下計(jì)算生后第3d、7d、14d輻射狀肺泡計(jì)數(shù)（Radial alveolar count RAC）

4、。采用免疫組化法檢測(cè)各組新生鼠生后第1d、3d、7d、14d肺組織中核因子-κBp65(NF-κBp65)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、30只孕鼠進(jìn)食、活動(dòng)均正常，無(wú)孕鼠發(fā)生死亡。孕鼠分娩情況:NS組共獲70(70/72)只新生鼠，LPS組共獲62(62/69)只新生鼠，DEX組共獲63(63/67)只新生鼠。宮內(nèi)感染組孕鼠胎盤(pán)及子宮血管充血、水腫、大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);生理鹽水組孕鼠胎盤(pán)及子宮檢

5、測(cè)均未見(jiàn)明顯炎性反應(yīng)。
　　2、肺組織的病理變化:宮內(nèi)感染組新生大鼠生后第3d肺組織可見(jiàn)肺泡數(shù)較對(duì)照組減少，肺泡膈減少，肺泡結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單化;生后第14d:肺泡數(shù)較對(duì)照組仍減少，肺泡膈厚度增加。地塞米松干預(yù)組新生大鼠肺組織出現(xiàn)類(lèi)似的病理變化，但程度減輕。宮內(nèi)感染組新生大鼠生后第3d、7d、14d肺組織中RAC較對(duì)照組減少(P＜0.05)，地塞米松干預(yù)后，新生大鼠生后第3d、7d、14d肺組織中RAC較宮內(nèi)感染組增加(P＜0.05)。三組

6、新生大鼠肺組織內(nèi)均未見(jiàn)明顯的肺實(shí)質(zhì)纖維化病變。
　　3、宮內(nèi)感染后，新生大鼠生后第1d、3d、7d、14d體重及肺重均較對(duì)照組減少(P＜0.05)。地塞米松干預(yù)組與宮內(nèi)感染相比新生大鼠生后第1d、3d、7d、14d體重及肺重均增加(P＜0.05)。
　　4、宮內(nèi)感染組新生大鼠生后第1d、3d、7d、14d肺組織中NF-κBp65、TNF-α表達(dá)較對(duì)照組明顯增加(P＜0.01)，兩者上升呈正相關(guān)性(r=0.975， P＜0.0

7、1)。
　　5、地塞米松干預(yù)組與宮內(nèi)感染相比:新生大鼠生后第1d、3d、7d、14d肺組織中NF-κBp65、TNF-α表達(dá)明顯下降(P＜0.01)，兩者下降呈正相關(guān)性(r=0.967，P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、腹腔內(nèi)注射LPS導(dǎo)致母鼠子宮胎盤(pán)內(nèi)血管充血、水腫，大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，建立孕鼠宮內(nèi)感染模型。宮內(nèi)感染后，新生大鼠體重、肺重降低，新生大鼠肺泡膈減少，增厚，肺泡數(shù)目減少，肺泡結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單化，RAC明顯減少

8、，提示宮內(nèi)感染使肺泡發(fā)育受損，導(dǎo)致了類(lèi)似支氣管肺發(fā)育不良病理變化。
　　2、宮內(nèi)感染后，新生大鼠肺組織中NF-κBp65及TNF-α表達(dá)明顯增加，提示細(xì)胞因子反應(yīng)在宮內(nèi)感染致新生大鼠支氣管肺發(fā)育不良中起到重要作用。
　　3、宮內(nèi)感染及地塞米松干預(yù)后，新生大鼠肺組織中NF-κBp65及TNF-α的變化趨勢(shì)基本一致，呈明顯的正相關(guān)性，提示NF-κBp65與TNF-α在宮內(nèi)感染致新大鼠支氣管肺發(fā)育不良中具有協(xié)同作用。
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