p53反義核酸個體性治療乳腺癌的實驗研究.pdf

1、目的：研究突變型p53外顯子8反義RNA(ASp53exon8'RNA)和野生型p53基因(WT-p53)共同轉染對人乳腺癌細胞系MDA-MB-231(含突變型p53外顯子8)細胞生長抑制、誘導凋亡及突變p53蛋白表達的阻斷作用，研究針對突變型p53進行體外雙重基因治療的效果。 方法：在脂質(zhì)體介導下向人乳腺癌細胞系MDA-MB-231(含突變型p53外顯子8)中轉染含野生型p53cDNA(WT-p53)的質(zhì)粒pC53-SN3，用

2、G418篩選穩(wěn)定表達的細胞克隆(WTp53-231細胞)；以含MDA-MB-231細胞中突變p53外顯子8的反義表達載體為模板，體外轉錄制備突變p53反義RNA單鏈分子，利用脂質(zhì)體介導反義RNA轉染W(wǎng)Tp53-231細胞；繪制轉染后細胞生長曲線，并計算細胞生長抑制率，測定MTT吸收值以觀察轉染細胞的代謝水平；TUNEL法檢測轉染細胞的凋亡狀態(tài)，免疫組化檢測反義拯救法抑制突變型p53表達的效果。結果：1、以脂質(zhì)體為介導用質(zhì)粒pC53-SN

3、3轉染人乳腺癌細胞系MDA-MB-231，經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定轉染細胞WTp53-231細胞。 2、基因工程產(chǎn)物ASp53exon8'RNA通過脂質(zhì)體介導轉染W(wǎng)Tp53-231細胞，引起(1)腫瘤細胞系增殖能力下降，生長趨勢明顯緩慢，而且在轉染后48h時生長抑制率最高。(2)轉染48h后MTT吸收值明顯下降，顯示細胞代謝受到抑制，活力下降。(3)轉染48h后TUNEL原位凋亡檢測顯示雙重基因治療可大大提高腫瘤細胞的凋亡指數(shù)。(