副豬嗜血桿菌對替米考星野生型折點和藥效學折點研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌可以引起豬的格拉澤氏病，表現(xiàn)為纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎、腦膜炎和肺炎，發(fā)病特點多呈現(xiàn)地域特征，給全球的養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失。替米考星作為大環(huán)內酯類動物專用藥，對畜禽的呼吸道疾病具有很好的治療作用。替米考星吸收速度快，半衰期長，肺部濃度高等藥動學特點，進一步促進了其在獸醫(yī)臨床上的應用。但我國目前養(yǎng)殖業(yè)用藥的不合理必然導致耐藥現(xiàn)象的產生，耐藥監(jiān)測具有必要性和緊迫性。而耐藥監(jiān)測需要判定標準，目前我國并沒有相關標準，主要參考

2、CLSI中的折點，CLSI標準中并沒有替米考星對副豬嗜血桿菌的折點規(guī)定。因此，為了監(jiān)測耐藥性產生，分析耐藥現(xiàn)狀和發(fā)展規(guī)律，更科學地指導臨床用藥和新藥開發(fā)，本課題參考CLSI中折點制定的方法建立了符合我國國情的野生型折點和藥效學折點，為折點的制定工作提供科學數(shù)據(jù)。
　　1替米考星對副豬嗜血桿菌野生型折點的制定
　　使用PCR方法對收集的103株副豬嗜血桿菌進行鑒定，結果全部呈現(xiàn)陽性，證明細菌全部為副豬嗜血桿菌。使用CLSI推薦

3、的瓊脂稀釋法對103株副豬嗜血桿菌進行MIC測定，MIC50為1μg/mL，MIC90為4μg/mL。
　　將測得的MIC數(shù)據(jù)進行以二為底的對數(shù)轉化，并使用Sigmastat軟件進行正態(tài)性檢驗，結果P值為0.200，符合正態(tài)分布。使用Graphpad prism軟件對數(shù)據(jù)進行非線性回歸擬合，當模擬值N≤16時，模擬值與真值相差0株菌，差異最小。使用NORMINV函數(shù)分別設定野生型上限的概率為99.9％和下限的概率為0.1％，得到野

4、生型分布范圍為0.015μg/mL～16μg/mL。使用NORMDIST函數(shù)分別求出高于野生型上限的概率為0.18％，和低于野生型下限的概率為0.07％。根據(jù)規(guī)定，野生型折點為野生型分布的上限，所以制定野生型折點為16μg/mL。
　　2、替米考星對副豬嗜血桿菌的作用特點
　　根據(jù)副豬嗜血桿菌SH0165株MIC的測定結果，分別設定1/4MIC、1/2MIC、1MIC、2 MIC、4 MIC、8 MIC、32 MIC濃度的藥

5、物與細菌進行孵育，分別在0h、1h、2h、4h、8h、12h、24 h各取0.1mL，使用稀釋法進行涂板計數(shù)。在36h對平板活菌數(shù)進行計數(shù)，以活菌數(shù)的對數(shù)值為縱坐標，以時間為橫坐標作圖，結果表明替米考星對副豬嗜血桿菌的作用呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　3、替米考星在豬血漿和肺部的藥動學研究
　　將12頭健康仔豬平均分成兩組，一組用來建立血漿藥動模型，一組用來建立肺部藥動模型，給藥劑量都為40 mg/kg，給藥方式為灌胃給藥。

6、　　血漿藥動組:分別在0.25 h、0.5 h、0.75 h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24 h、36h、48 h、72 h、96 h采集血液2 mL，根據(jù)建立的高效液相檢測方法檢測血漿中藥物濃度。使用Winnonlin軟件對獲得的藥時數(shù)據(jù)進行擬合，采用的是有吸收的二室開放模型，得到的主要藥動學參數(shù):AUC24=32.10μg·h/mL，Tmax=3.50 h，Cmax=1.73μg/mL。
　　肺部藥動組:根據(jù)

7、制定的麻醉方案將動物麻醉，在給藥前分別采集血液2mL，給藥后分別在0.5 h、2h、4h、6h、8h、12h、24 h、36h、48 h、72 h、96 h通過肺泡灌洗技術注入50 mL生理鹽水，并回收肺泡灌洗液，根據(jù)建立的高效液相檢測方法檢測灌洗液中藥物濃度。另外檢測灌洗液和血漿中尿素氮的濃度，結果表明，藥物經(jīng)過了約10倍稀釋。使用Winnonlin軟件對獲得的藥時數(shù)據(jù)進行擬合，采用的是非房室模型，得到的主要的藥動學參數(shù):AUC24=

8、72.59μg·h/mL，Tmax=48 h，Cmax=4.72μg/mL。
　　4、替米考星藥效學折點的建立
　　根據(jù)肺部藥動獲得的6頭豬的AUC24數(shù)據(jù):47.17μg·h/mL、93.76μg·h/mL、69.06μg·h/mL、75.57μg·h/mL、63.46μg· h/mL、86.50μg·h/mL。分別計算平均值為72.59μg·h/mL，標準差為16.69μg·h/mL。根據(jù)藥動學參數(shù)符合對數(shù)正態(tài)分布，使用

9、Crystalball軟件進行蒙特卡洛模擬，得出10000頭份的AUC數(shù)據(jù)。將藥效學目標設定為30h，分別計算不同MIC下AUC/MIC的達標率，當MIC為1μg/mL時，達標率為100％，當MIC為2μg/mL時，達標率為76％，根據(jù)規(guī)定，達標率不小于90％的最大MIC即為藥效學折點，所以制定替米考星對副豬嗜血桿菌的藥效學折點為1μg/mL。
　　綜上所述，本課題建立了副豬嗜血桿菌對替米考星的野生型折點。完善了動物肺泡灌洗技術，