當(dāng)歸不同栽培品種種子與藥材質(zhì)量的相關(guān)性研究.pdf

1、當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便的功效。本課題以當(dāng)歸7個(gè)選育新品種（品系）（岷歸1～5號(hào)已審定）為研究對(duì)象，針對(duì)其種子質(zhì)量參差不齊、缺乏質(zhì)量評(píng)價(jià)控制標(biāo)準(zhǔn)，種子與藥材質(zhì)量缺乏相關(guān)性研究，不同栽培品種藥材缺乏藥效學(xué)、安全性評(píng)價(jià)，優(yōu)良品種選育工作與實(shí)際生產(chǎn)脫節(jié)，未能進(jìn)行有效推廣應(yīng)用等現(xiàn)狀問題，綜合應(yīng)用生藥學(xué)、中藥化學(xué)、藥理學(xué)、農(nóng)學(xué)等多學(xué)科的方法，集成ISS

2、R、HPLC、GC-MS、ICP-MS等技術(shù)，借助灰色關(guān)聯(lián)度、熵權(quán)TOPSIS模型等數(shù)學(xué)分析方法，首次系統(tǒng)評(píng)價(jià)了當(dāng)歸不同栽培品種（品系）種子與藥材質(zhì)量的相關(guān)性，并與引種朝鮮當(dāng)歸、不同產(chǎn)地市售當(dāng)歸進(jìn)行對(duì)比，揭示和探討了“形—質(zhì)—效”的科學(xué)內(nèi)涵，具有理論意義和應(yīng)用價(jià)值。主要研究結(jié)果如下：
　　1、當(dāng)歸不同栽培品種、引種朝鮮當(dāng)歸、市售當(dāng)歸種子的遺傳多樣性研究
　　利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，建立并優(yōu)化了當(dāng)歸種子的ISSR-PCR反應(yīng)

3、體系，篩選出17條能準(zhǔn)確鑒別當(dāng)歸不同栽培品種種子的引物，分析得出通過重離子輻照生物育種方法選育出的岷歸3號(hào)、岷歸4號(hào)遺傳信息豐富，可以作為分子標(biāo)記輔助育種的首選研究材料。
　　2、當(dāng)歸不同栽培品種種子的分級(jí)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　結(jié)合其他農(nóng)作物種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以凈度、千粒重、發(fā)芽率、種子活力等為指標(biāo)，制定了已審定的當(dāng)歸栽培品種種子的分級(jí)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及甘肅地產(chǎn)當(dāng)歸種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為當(dāng)歸種子的質(zhì)量控制及其規(guī)范生產(chǎn)提供了參考資料。
　　3

4、、當(dāng)歸不同栽培品種種子微觀形態(tài)鑒別
　　利用掃描電子顯微鏡觀察分析得出，通過種子形狀、顏色等無法對(duì)當(dāng)歸不同栽培品種種子進(jìn)行鑒別，只能通過種子表面隆起及紋飾特征（一級(jí)紋理、二級(jí)紋理）進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別，而且種子油室的個(gè)數(shù)及大小與種子含油量呈正相關(guān)。
　　對(duì)于目前當(dāng)歸市售種子混雜的情況，通過種子形狀、顏色、翅的有無、隆起間距、油室的分布情況可對(duì)正品當(dāng)歸與摻偽朝鮮當(dāng)歸、東當(dāng)歸進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別。
　　4、當(dāng)歸不同栽培品種種子含油量及組分

5、分析
　　首次鑒定出當(dāng)歸種子油中11種脂肪酸成分，總結(jié)歸納出成分含量與種子成熟度的相關(guān)性，初步確定當(dāng)歸主產(chǎn)地種子最佳采收期為8月22日至8月30日；主成分分析得出，己酸、油酸、癸酸是當(dāng)歸種子共有的特征性脂肪酸組成；對(duì)樣品進(jìn)行聚類分析可將當(dāng)歸不同栽培品種（品系）及不同成熟度種子樣品進(jìn)行分類。
　　5、當(dāng)歸不同栽培品種種子質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)
　　以千粒重、發(fā)芽率、種子活力、生理生化指標(biāo)、脂肪油含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，借助灰色關(guān)聯(lián)分析方

6、法，構(gòu)建了評(píng)價(jià)當(dāng)歸種子質(zhì)量的灰色關(guān)聯(lián)分析模型。結(jié)果表明，岷歸4號(hào)、岷歸3號(hào)種子質(zhì)量最優(yōu)；其次為岷歸2號(hào)、岷歸1號(hào)及岷歸5號(hào)；90-03及2000-01種子質(zhì)量相對(duì)較差；市售當(dāng)歸種子中，道地產(chǎn)區(qū)岷縣、漳縣的種子質(zhì)量較優(yōu)，吉林、安國將東當(dāng)歸、朝鮮當(dāng)歸種子誤當(dāng)作當(dāng)歸種子出售。實(shí)驗(yàn)表明，引種東當(dāng)歸、朝鮮當(dāng)歸、安國及吉林市售種子發(fā)芽率均低于52％，出苗率低于40%，質(zhì)量最差，不可用于生產(chǎn)。
　　6、當(dāng)歸不同栽培品種藥材質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)

7、　　以揮發(fā)油、阿魏酸、丁烯基苯酞、藁本內(nèi)酯、歐當(dāng)歸內(nèi)酯A、多糖、總黃酮浸出物含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，借助TOPSIS法，構(gòu)建了基于多指標(biāo)評(píng)價(jià)體系的當(dāng)歸藥材質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)TOPSIS模型，結(jié)果表明，岷歸4號(hào)、岷歸3號(hào)、野生當(dāng)歸藥材質(zhì)量最優(yōu)，其次為岷縣、漳縣產(chǎn)當(dāng)歸，以及栽培品系2000-01、栽培品種岷歸2號(hào)、岷歸5號(hào)、岷歸1號(hào)；引種朝鮮當(dāng)歸、青海產(chǎn)當(dāng)歸藥材質(zhì)量最差。其中岷歸4號(hào)揮發(fā)油含量分別是引種朝鮮當(dāng)歸、青海產(chǎn)當(dāng)歸的3.17、1.48倍，藁本內(nèi)酯

8、的含量是引種朝鮮當(dāng)歸、青海產(chǎn)當(dāng)歸的6.58、1.69倍。通過上述研究，建議當(dāng)歸現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)增加丁烯基苯酞、藁本內(nèi)酯兩個(gè)成分指標(biāo)的含量測(cè)定及藥材的特征指紋圖譜。
　　7、當(dāng)歸不同栽培品種藥材與商品等級(jí)相關(guān)性研究
　　根據(jù)《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》，首次對(duì)當(dāng)歸不同栽培品種（品系）藥材全歸進(jìn)行等級(jí)劃分，對(duì)各等級(jí)比例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果表明，岷歸3號(hào)、岷歸4號(hào)、岷歸5號(hào)以一等全歸為主，比例在35%以上，其次為二等全歸，比例在33%以上，

9、三等、四等全歸的比例不足30%，沒有五等全歸；岷歸1號(hào)、2000-01以二等全歸為主，比例為37.50～39.58%，三等、四等全歸的比例不足30%，五等全歸的比例在2%以上；岷歸2號(hào)以四等全歸為主，比例在33%以上，其次為一等全歸比例為22.92%，二等全歸比例為20.83%，三等全歸的比例不足20%，五等全歸的比例在4%以上；90-03以三等全歸為主，比例在33%以上，但一等全歸的比例僅為10.42%，二等全歸、四等全歸的比例均不足

10、26.00%，五等全歸的比例達(dá)8%以上。按商品等級(jí)中優(yōu)等全歸的比例得出，岷歸3號(hào)、岷歸4號(hào)、岷歸5號(hào)為優(yōu)良種子。此外，對(duì)商品當(dāng)歸等級(jí)劃分提出了可行性建議。
　　8、當(dāng)歸不同栽培品種藥材的藥效學(xué)評(píng)價(jià)
　　對(duì)當(dāng)歸不同提取部分進(jìn)行補(bǔ)血、活血、補(bǔ)氣作用藥效評(píng)價(jià)，研究結(jié)果表明，按照傳統(tǒng)方法煎煮提取對(duì)乙酰苯肼（APH）致血虛癥狀改善作用更為明顯；當(dāng)歸70%乙醇提取部分對(duì)氣虛癥狀改善作用更為明顯。采用篩選出的有效提取部分對(duì)當(dāng)歸不同栽培品種

11、（品系）藥材補(bǔ)血、活血、補(bǔ)氣作用進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)，岷歸3號(hào)、岷歸4號(hào)、野生當(dāng)歸、岷縣及漳縣產(chǎn)當(dāng)歸補(bǔ)血、活血、補(bǔ)氣作用優(yōu)于其他樣品。
　　9、當(dāng)歸不同栽培品種藥材安全性評(píng)價(jià)
　　對(duì)當(dāng)歸不同栽培品種（品系）、引種朝鮮當(dāng)歸、野生當(dāng)歸及不同產(chǎn)地當(dāng)歸樣品進(jìn)行了有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量、重金屬及有害元素含量測(cè)定，結(jié)果表明，90-03歸尾、2000-01歸尾、渭源產(chǎn)的當(dāng)歸歸尾中γ-BHC超標(biāo)，2000-01歸頭中銅（Cu）含量超標(biāo)，其余樣品均符合《

12、中華人民共和國藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定。
　　利用灰色關(guān)聯(lián)度法對(duì)其安全性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)得出，安全性綜合排名在前10名的為：岷歸4號(hào)歸尾、歸身，岷歸3號(hào)歸身，岷歸4號(hào)歸頭，岷歸2號(hào)歸身，岷歸3號(hào)歸尾，岷歸2號(hào)歸尾，野生當(dāng)歸歸身、歸尾及歸頭。岷歸4號(hào)、岷歸3號(hào)、野生當(dāng)歸、岷歸2號(hào)整體安全性優(yōu)于其他樣品。此外，當(dāng)歸不同部位對(duì)重金屬及有害元素的富集程度不同，歸頭對(duì)重金屬鉛（Pb）、鎘（Cd）、銅（Cu）的富集程度較高，歸尾對(duì)重

13、金屬砷（As）、汞（Hg）的富集程度較高，歸身對(duì)重金屬的富集程度相對(duì)較低。
　　對(duì)輻照選育品種岷歸3號(hào)、岷歸4號(hào)藥材進(jìn)行小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明，當(dāng)歸輻照選育品種藥材毒性很小，未測(cè)得灌胃給藥小鼠半數(shù)致死量LD50，其最大耐藥量（MTD）>40g/kg，最大耐受量倍數(shù)相當(dāng)成人60kg用量的120倍，實(shí)驗(yàn)證明當(dāng)歸輻照選育品種藥材無明顯毒性，臨床常用量安全可行。
　　10、當(dāng)歸不同栽培品種種子與藥材相關(guān)性
　　通過對(duì)當(dāng)