2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、目的：合成適合畢赤酵母表達(dá)的乙型肝炎病毒(HBV)e抗原基因，在畢赤酵母中表達(dá)出高特異性和高免疫反應(yīng)性的重組乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)。 方法：采用聚合酶鏈反應(yīng)從含HBV全基因序列(adw)的質(zhì)粒PHBV1中擴(kuò)增出野生型e基因，在兩個(gè)不同的位點(diǎn)定向插入酵母表達(dá)載體pPICZαA，構(gòu)建兩種重組質(zhì)粒CZαA-eAg；采取基因搭橋法及Taq酶聚合反應(yīng)，選用酵母偏愛(ài)的同義密碼子替換野生型e基因的部分密碼子，制備合成e基因(syne

2、Ag基因)，在兩個(gè)不同的位點(diǎn)定向插入pPICZαA酵母表達(dá)載體，構(gòu)建兩種重組質(zhì)粒CZαA-syneAg；SacI消化重組質(zhì)粒，用電轉(zhuǎn)法將線性化的攜帶有野生型和合成e基因的四種重組pPICZαA分別轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌株GS115，，篩選His+Muts表型轉(zhuǎn)化子，經(jīng)甲醇誘導(dǎo)表達(dá)HBeAg。 結(jié)果：酶切電泳及DNA測(cè)序證實(shí)野生型及合成e基因已正確克隆到表達(dá)載體中；聚丙烯酰胺凝膠電泳及ELISA顯示HBeAg在畢赤酵母中分泌表達(dá)，含CZα

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