IL-18對(duì)腎小管上皮細(xì)胞Col-Ⅳ及MCP-1表達(dá)和分泌影響.pdf

1、腎纖維化是幾乎所有慢性腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎功能衰竭的共同通路。腎小管-間質(zhì)的損害與腎功能毀損密切相關(guān)。腎小管-間質(zhì)的損傷在病理上表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞的變性、萎縮和消失，間質(zhì)纖維化以及炎癥細(xì)胞浸潤。腎小管上皮細(xì)胞在RIF過程中起極其重要的作用。腎小管上皮細(xì)胞在各種致病因子作用下轉(zhuǎn)分化成肌成纖維細(xì)胞，該細(xì)胞游走而使腎小管完整性受損，分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)，以及許多炎癥因子，如轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)?；罨蟮哪I小管上皮細(xì)胞增加了趨化因

2、子如單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)，RANTES等的分泌，從而趨化各種炎癥細(xì)胞浸潤并激活其產(chǎn)生各種炎癥因子及細(xì)胞因子。這些因素的共同作用下最終導(dǎo)致RIF。白細(xì)胞介素-18(IL-18)是一新發(fā)現(xiàn)的主要由單核-巨噬樣細(xì)胞分泌的單核因子，能夠強(qiáng)烈誘導(dǎo)γ-干擾素(IFN-γ)及其它細(xì)胞因子的產(chǎn)生和活化。在許多慢性腎病中，研究發(fā)現(xiàn)在血、尿及腎組織中有IL-18異常表達(dá)，并且IL-18的表達(dá)量與腎小管-間質(zhì)的損害程度呈正相關(guān)。推測(cè)IL-18參

3、與腎小管-間質(zhì)的損傷。我們前期體外研究提示IL-18促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化，表達(dá)a-SMA，促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞凋亡。本研究擬進(jìn)一步通過觀察IL-18對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)和分泌Ⅳ膠原(Col-Ⅳ)及趨化因子MCP-1的影響，進(jìn)一步明確IL-18在慢性腎病中的作用。 [方法]應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)人近曲小管上皮細(xì)胞株(HK-2)。0(對(duì)照)、0.1、1、10、100ng/mL的IL-18作用于HK-2細(xì)胞24h、48h和72h。運(yùn)用

4、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)Col-Ⅳ及MCP-1的信使核糖核酸(mRNA)表達(dá)水平。采用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(ELISA)測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清中Col-Ⅳ及MCP-1分泌水平。 [結(jié)果] 1.IL-18使HK-2細(xì)胞合成Col-Ⅳ及MCP-1mRNA增加 0(對(duì)照)、0.1、1、10、100ng/mL的IL-18作用于HK-2細(xì)胞24h、48h和72h后，RT-PCR檢測(cè)其對(duì)HK-2細(xì)胞表達(dá)Col-Ⅳ及M

5、CP-1mRNA的影響。結(jié)果示IL-18劑量和時(shí)間依賴性地增加Col-Ⅳ及MCP-1mRNA的表達(dá)。 2.IL-18使HK-2細(xì)胞分泌Col-Ⅳ及MCP-1蛋白增加 0(對(duì)照)、0.1、1、10、100ng/mL的IL-18作用于HK-2細(xì)胞24h、48h和72h后，ELISA法檢測(cè)其對(duì)HK-2細(xì)胞分泌Col-Ⅳ及MCP-1蛋白的影響。結(jié)果示IL-18呈劑量和時(shí)間依賴性地使HK-2細(xì)胞分泌Col-Ⅳ蛋白增加。而HK-2細(xì)