大鼠ECLE術(shù)后LECs基因差異表達(dá)和Ccnd1-ASON脂質(zhì)體抑制PCO的研究.pdf

1、研究目的建立大鼠后囊膜混濁(PCO)模型；應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)大鼠ECLE手術(shù)后晶狀體上皮細(xì)胞(LECs)基因差異表達(dá)，為系統(tǒng)揭示PCO的分子機(jī)制提供理論依據(jù)；探索防治PCO的分子生物學(xué)方法。 研究方法(1)12只SD大鼠隨機(jī)分成4組雙眼行ECLE，術(shù)后即刻、1d、7d、14d摘除眼球進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，研究殘留LECs增殖、移行和后囊膜的動(dòng)態(tài)變化，應(yīng)用方差分析比較LECs增殖數(shù)量。 (2)20只SD大鼠隨機(jī)分成4組，雙

2、眼行ECLE，分別于手術(shù)后即刻、1d、7d、14d處死大鼠完整取出囊膜，同組囊膜標(biāo)本混合后Trizol法提取RNA，對(duì)樣品RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和熒光標(biāo)記，用含有5705個(gè)大鼠基因探針的oligo芯片分別檢測(cè)術(shù)后1d、7d、14d與術(shù)后即刻組相比的基因差異表達(dá)；選取基因Bfsp1、Ccnd1、Cdk4、Cdkn1b、Cdkn2b進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)驗(yàn)證芯片結(jié)果。 (3)48只SD大鼠隨機(jī)分為3組，雙眼行EC

3、LE，術(shù)中前房?jī)?nèi)分別注入Ccnd1基因反義寡核苷酸(Ccnd1-ASON)脂質(zhì)體、Ccnd1基因正義寡核苷酸(Ccnd1-SON)脂質(zhì)體、無藥脂質(zhì)體溶液50μl;每組隨機(jī)取4只分別于術(shù)后即刻、1d、7d、14d處死，完整摘出眼球，其中4只眼球行qRT-PCR檢測(cè)LECsCcnd1表達(dá)變化，4只眼球進(jìn)行組織病理學(xué)和周期蛋白D1(CyclinD1)免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用方差分析比較LECs增殖數(shù)量和晶狀體CyclinD1陽性細(xì)胞積分光密度(

4、IOD)值。 研究結(jié)果(1)所有大鼠均成功施行ECLE。術(shù)后即刻可見前囊膜下及赤道部有單層的LECs排列；術(shù)后1d赤道部形成由2～3層細(xì)胞組成的團(tuán)塊，LECs沿囊膜向后囊遷移；術(shù)后7d囊袋赤道部及后囊膜下形成多層細(xì)胞結(jié)構(gòu)，赤道部晶狀體纖維樣物質(zhì)增加，部分后囊膜出現(xiàn)明顯皺褶；術(shù)后14d囊袋赤道部及后囊膜下LECs形成團(tuán)塊，赤道部形成晶狀體纖維樣結(jié)構(gòu)，赤道部Soemmering環(huán)形成。隨術(shù)后時(shí)間延長(zhǎng)，單位面積(/mm3)LECs數(shù)量

5、明顯增加(p＜0.05)。 (2)基因芯片實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制可靠，結(jié)果可信。術(shù)后1d、7d、14d差異表達(dá)基因數(shù)分別為351(6.2％)、252(4.4％)、367(6.4％)，其中上調(diào)基因數(shù)分別為196、120、171，下調(diào)基因數(shù)分別為155、132、196；3張芯片結(jié)果綜合，差異表達(dá)基因共694條。發(fā)生差異表達(dá)的基因范圍非常廣泛，涉及所有細(xì)胞功能類別。(3)術(shù)后1d、7d、14d，反義組Ccnd1表達(dá)量均明顯低于正義組和無藥組，單

6、位面積LECs數(shù)量和CyclinD1陽性細(xì)胞IOD值均明顯低于正義組和無藥組(p＜0.05)；正義組和無藥組之間無明顯差異。 結(jié)論(1)大鼠ECLE手術(shù)后殘留LECs增殖、移行，后囊膜皺縮，隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸加劇，是較為理想的PCO模型。 (2)大鼠ECLE手術(shù)后LECs基因差異表達(dá)非常廣泛、復(fù)雜，提示PCO的分子機(jī)制復(fù)雜，調(diào)控因素眾多，PCO可能是多因素綜合作用的結(jié)果。 (3)Ccnd1-ASON前房注射能有效降低