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1、根據(jù)Genbank發(fā)表的布魯氏菌bp26基因和OMP10基因分別設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物,提取11株實(shí)驗(yàn)室分離的呼和浩特地區(qū)布魯氏菌和兩株參考布魯氏菌的總DNA為模板,通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增得到bp26和OMP10基因,回收純化后將這兩個(gè)基因分別連接到PMD18-T載體上,熱激發(fā)轉(zhuǎn)化受體菌大腸桿菌DH5a,藍(lán)白斑篩選陽(yáng)性克隆,提取質(zhì)粒后進(jìn)行序列測(cè)定。測(cè)序結(jié)果顯示,bp26基因全長(zhǎng)為995bp,包含一個(gè)由753bp組成的完整開(kāi)
2、放閱讀框架,編碼250個(gè)氨基酸。11株分離菌株的同源性為100%,與疫苗株M5、S2的同源性分別為100%和99.9%,與參考菌株S19、870的同源性分別為99.9%和100%。OMP10基因全長(zhǎng)531bp,包含一個(gè)由381bp組成的完整開(kāi)放閱讀框架,編碼126個(gè)氨基酸。11株分離菌株的同源性為100%,與疫苗株M5、S2的同源性均為100%,與參考菌株544的同源性為99.7%。 為了彌補(bǔ)血清學(xué)和微生物學(xué)方法檢測(cè)和診斷布魯氏
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