“草原”美國薄荷的組織培養(yǎng)及揮發(fā)油成份研究.pdf

1、本試驗以“草原”美國薄荷(Monardadidyma‘Praricnacht’)帶芽莖段、葉片和葉柄為材料，進行莖段培養(yǎng)和愈傷組織培養(yǎng)同時，利用GC-MS技術(shù)分析“草原”美國薄荷實生苗和試管苗的葉片揮發(fā)油成份，以期為美國薄荷離體培養(yǎng)建立有效途徑，為美國薄荷工廠化試管育苗及種質(zhì)資源保存提供理論依據(jù)。運用正交試驗設(shè)計方法和Excel、SPSS軟件進行數(shù)據(jù)處理，主要研究結(jié)果如下： (1)通過組織培養(yǎng)技術(shù)研究得出： ①種子發(fā)芽及

2、無菌苗的獲得的最佳途徑為：先將“草原”美國薄荷種子在發(fā)芽盒中萌發(fā)出苗，再用0.1％HgCl2滅菌2min，接入MS空白培養(yǎng)基中，效果最好。發(fā)芽率為45％，污染率為10％，死亡率為45％。 ②初代培養(yǎng)：帶芽莖段培養(yǎng)以MS+6.BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1為最適宜培養(yǎng)基配方組合，啟動率達98.33％，平均新梢長為4.23cm。葉片、葉柄、和莖段的愈傷組織培養(yǎng)以MS+6-BA3.0mg·L-1+NAA0.05mg

3、·L-1+2,4-D0.1mg·L-1為最適宜培養(yǎng)基配方組合，出愈率為100％。 ③繼代培養(yǎng)：適宜于莖段芽苗增殖培養(yǎng)的最適宜培養(yǎng)基配方組合為：MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.01mg·L-1+IBA0.5mg·L-1，芽苗增殖倍數(shù)達3.9，腋芽萌發(fā)早，有效苗多，且健壯。愈傷增殖的最適宜培養(yǎng)基配方組合為：MS+6-BA2.0·L-1+NAA0.1mg·L-1+2,4-D0.1mg·L-1，愈傷的增殖率為81.6％。

4、 ④愈傷組織分化培養(yǎng)：愈傷組織分化的最適宜培養(yǎng)基配方組合為：MS+BA2.0mg·L-1+TDZ1.0mg·L-1+ZT0.25mg·L-1+NAA0.05mg·L-1分化培養(yǎng)最好，分化率為40％。 ⑤壯苗與生根培養(yǎng)：以空白培養(yǎng)基MS為最適宜的壯苗培養(yǎng)基配方。生根培養(yǎng)的最適宜培養(yǎng)基配方為：1/2MS+蔗糖30g·L-1+IBA0.05mg·L-1，生根率達100％，平均根長達4.16cm，平均根數(shù)為4.5條。 ⑥煉苗

5、與移栽：最適宜的移栽基質(zhì)為珍珠巖：蛭石：河沙(1:1:2)，成活率為92.5％。 (2)通過揮發(fā)油成份的氣相色譜-質(zhì)質(zhì)譜(GC-MS)分析研究得出： 以“草原”美國薄荷實生苗與組培苗的葉片為材料，利用GC-MS技術(shù)共分離鑒定出28種化學(xué)成分。其中實生苗揮發(fā)油鑒別出25種化學(xué)成份，而組培苗鑒別出有23種。發(fā)現(xiàn)兩者的葉片揮發(fā)油的主要化學(xué)成份無明顯的差異，其主要的化學(xué)成分為：麝香草酚，γ-松油烯，鄰-聚傘花素，1-辛烯-3-醇