家蠶感染濃核病毒中國(guó)（鎮(zhèn)江）株相關(guān)組織蛋白研究.pdf

1、家蠶濃核病毒是感染家蠶的四種主要病毒之一，主要通過食下感染，與其它濃核病毒不同，家蠶濃核病毒只感染家蠶中腸上皮組織的圓筒型細(xì)胞。患病蠶呈現(xiàn)空頭，下痢，吐液等癥狀，是蠶桑生產(chǎn)上一種比較嚴(yán)重的病毒病。家蠶品種間對(duì)濃核病毒的感受性差異很大，一些品種對(duì)BmDNV具有完全的非感受性，而一些品種極易感染，家蠶對(duì)濃核病毒感受性差異的蛋白質(zhì)分子機(jī)理目前尚不十分明確。 本研究以對(duì)家蠶濃核病毒鎮(zhèn)江株(BombyxmoridensovirusZhen

2、jiangStrain，BmDNV-ZJ)感受性和非感受性近等基因系蠶品種為材料，采用生物測(cè)定、地高辛標(biāo)記的酶聯(lián)免疫測(cè)定、蛋白質(zhì)雙向電泳和基質(zhì)輔助質(zhì)量飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)，在蛋白水平上對(duì)家蠶感染濃核病毒相關(guān)組織進(jìn)行了研究，研究結(jié)果將有助于進(jìn)一步弄清家蠶對(duì)BmDNV的感受性分子機(jī)制，闡明家蠶濃核病毒的致病機(jī)理。 通過生物測(cè)定和地高辛標(biāo)記的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定初步分析了家蠶對(duì)BmDNV-ZJ的感受性機(jī)制。試驗(yàn)表明：家蠶的消化液、血液中不存在

3、對(duì)BmDNV-ZJ侵染性有影響的蛋白因子，感受性家蠶品種的中腸組織蛋白中可能存在對(duì)BmDNV-ZJ侵染性有影響的蛋白因子，而非感受性家蠶品種的中腸組織蛋白中不存在影響B(tài)mDNV-ZJ侵染性的蛋白因子，且BmDNV-ZJ與感受性家蠶品種中腸組織蛋白的結(jié)合具有組織特異性。 通過蛋白質(zhì)雙向電泳和基質(zhì)輔助質(zhì)量飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)對(duì)兩個(gè)不同感受性家蠶品種的中腸組織蛋白進(jìn)行了比較分析。2-DE電泳結(jié)果表明，兩個(gè)品種間的中腸組織蛋白的點(diǎn)數(shù)、位置、

4、點(diǎn)形等差異很小。MALDI-TOFMS鑒定的9個(gè)差異蛋白點(diǎn)中都有較強(qiáng)的肽質(zhì)量指紋信號(hào)峰，其中感受性品種JS的中腸組織中有6個(gè)差異蛋白點(diǎn)，4個(gè)可能為氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合酶β亞基1，氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合酶β亞基2，組織蛋白酶D或3-羥酰輔酶A脫氫酶；抵抗性蠶品種NIL的中腸組織中有3個(gè)差異蛋白點(diǎn)，2個(gè)可能是組織蛋白酶。 通過對(duì)BmDNV-ZJ感受性和非感受性蠶品種血液和圍食膜組織蛋白比較分析表明：兩個(gè)蠶品種的血液和圍食膜組織蛋白的差異很

5、小，其凝膠圖譜上的蛋白點(diǎn)數(shù)、位置、點(diǎn)形等都幾乎一樣。兩品種的血液組織蛋白大多為一類中性略偏堿性的蛋白質(zhì)，酸性和堿性極端的蛋白質(zhì)很少；圍食膜組織部分蛋白大多為一類中低分子量、偏中性的蛋白質(zhì)。 在血液組織蛋白中發(fā)現(xiàn)5個(gè)有顯著差異的蛋白點(diǎn)；其中只在感受性蠶品種血液組織中發(fā)現(xiàn)的差異蛋白可能為酪蛋白激酶，另一個(gè)可能為新型組織蛋白；而在非感受性蠶品種血液中發(fā)現(xiàn)的特異蛋白點(diǎn)可能是類絲氨酸蛋白酶、線粒體延伸因子，而且其血淋巴蛋白的含量也極顯著地

6、高于感受性品種。從這些差異蛋白點(diǎn)可能的功能中可以看出，家蠶品種間對(duì)BmDNV-ZJ感受性差異可能與蠶品種間的血液組織蛋白差異無關(guān)。 在圍食膜組織蛋白中共發(fā)現(xiàn)4個(gè)有顯著差異的蛋白點(diǎn)，其中在感受性蠶品種圍食膜組織中，發(fā)現(xiàn)1個(gè)可能為新型組織蛋白的特異性蛋白點(diǎn)，其余3個(gè)蛋白點(diǎn)在含量上相互間存在顯著差異。所發(fā)現(xiàn)的4個(gè)差異蛋白點(diǎn)是否與蠶品種對(duì)BmDNV-ZJ感受性差異有關(guān)尚待進(jìn)一步研究。 感受性蠶品種在BmDNV-ZJ侵染初期，中腸

7、組織受BmDNV-ZJ誘導(dǎo)產(chǎn)生的蛋白可能為Serpin-2(調(diào)控蛋白酶活性和細(xì)胞凋亡)和Thiolperoxiredoxin(具有抗氧化、消除自由基等功能)。血液組織受誘導(dǎo)而得到特異性表達(dá)的蛋白可能是絲裂原活化蛋白激酶(調(diào)控細(xì)胞凋亡)或類抗氧化酶蛋白(具有抗氧化、消除自由基等功能)。表明感受性蠶品種在BmDNV-ZJ感染初期，其內(nèi)生性免疫防御途徑可能通過受侵染部位(中腸)和免疫防御組織(血液)分泌抗氧化蛋白等抗性蛋白因子和細(xì)胞凋亡等方式