玉屏風提取液對環(huán)磷酰胺致大鼠骨質疏松的防治作用觀察及其質量控制研究.pdf

1、目的 1．研究用環(huán)磷酰胺建立大鼠骨質疏松的動物模型，并觀察該類型骨質疏松的骨形態(tài)計量學、骨代謝和骨生物力學的改變情況。2．探討玉屏風提取液對此類型的骨質疏松的骨形態(tài)計量學、骨代謝和骨生物力學的影響。3．建立起玉屏風提取液的指紋圖譜，從而為其質量標準的建立及日后有效成分的尋找打下基礎。 方法 1．藥理學部分40只大鼠隨機分為4組，正常對照組(control組)：灌胃給予5ml/Kg.d生理鹽水。環(huán)磷酰胺組(CP組)

2、：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5mg/Kg.d。玉屏風提取液組：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5mg/Kg.d及玉屏風提取液(YPF組)5ml/Kg.d，碳酸鈣+VD組：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5mg/Kg.d及0．4mg/kg.d。于實驗第15d處死動物，取左側脛骨進行骨組織形態(tài)計量動靜態(tài)學參數骨小梁面積百分數(％Tb．At)，骨小梁厚度(Tb．Th)，骨小梁數量(Tb．N)，骨小粱分離度(Tb．SP)，動態(tài)參數包括熒光標志周長百分數(％L．Pm)，礦化沉

3、積率(MAR)，骨小粱周長形成率(BFR/BS)，骨小粱面積形成率(BFR/BV)，骨小粱體積形成率(BFR/TV)測量；取右側股骨，進行骨生物力學參數彈性載荷，彈性橈度，最大載荷，最大橈度，剛度，骨鈣，骨磷，骨鎂及骨羥脯氨酸含量測定。 2．質量控制部分重復提取玉屏風提取液10份，通過HPLC建立起合適的分析方法對其中成分進行分析，找出其中穩(wěn)定存在的共有峰，建立玉屏風提取液指紋圖譜。 結果 1．環(huán)磷酰胺及玉屏風提

4、取液對大鼠骨形態(tài)計量學參數的影響與對照組比較，環(huán)磷酰胺模型組大鼠脛骨松質骨組織形態(tài)計量學靜念參數4個指標差異有統(tǒng)計學意義，其中骨小梁面積百分數(％Tb．Ar)降低了48.5％(P<0.05)、骨小梁厚度(Tb.Th)降低了17.9％(P<0.05)、骨小梁分離度(Tb.Sp)(P<0.01)增加了67.9％(P<0.05)；骨小梁數量(Tb.N)降低了37.8％(P<0.01)。動態(tài)參數方面，熒光周長百分數％L.Pm減少了54.5％，骨

5、礦化沉積率MAR，骨形成率BFR/BS、BFR/BV、BFR/TV分另U降低了21.6％、61.0％、50.0％、72.2％(P<0.05)。骨吸收參數方面，與對照組比較，環(huán)磷酰胺組單位骨小梁面積破骨細胞數(Oc.N)、破骨細胞周長百分數(％Oc.Pm)。與環(huán)磷酰胺模型組相比，玉屏風提取液組使％Tb.Ar增加了127.7％(P<0.01)，Tb.Th增加了27.3％(P<0.01)，Tb.N增加了75.6％(P<0.01)，Tb.SP減

6、少了43.1％(P<0.05)，動態(tài)學參數方面，％LPm增加了114.0％，MAR增加了61.5％(P<0.01)，BFR/BS增加了278.6％(P<0.05)，BFR/BV增加了191.5％(P<0.05)，BFR/TV增加了410.0％(P<0.05)，骨吸收參數方面，Oc.N、％Oc.Pm差異無統(tǒng)計學意義。 2.環(huán)磷酰胺及玉屏風提取液對大鼠骨生物力學的影響與對照組相比，環(huán)磷酰胺模型組骨生物力學的兩個指標最大載荷(降低了1

7、6.2％)及剛度(降低了27.7％)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組比較，玉屏風提取液組的兩個指標最大載荷(增加了25.7％)及剛度(增加了67.9％)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 3.環(huán)磷酰胺及玉屏風提取液對大鼠骨鈣及骨羥脯氨酸含量的影響與對照組比較：環(huán)磷酰胺模型組大鼠脛骨骨代謝5個指標骨羥脯氨酸/骨干重(降低了26.1％)、骨有機質/骨干重(降低了26.1％)、骨鈣總量/骨干重(降低了17.6％)、骨磷總量/

8、骨干重(降低了12.4％)及骨鎂總量/骨干重(降低了24.7％)差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與模型組比較：玉屏風提取液組大鼠脛骨骨代謝5個指標差異均有統(tǒng)計學意義，其中骨鈣總量/骨干重(增加了22.0％)(P<0.01)；骨鎂總量/骨干重(增加了38.4％)、骨磷總量/骨干重(增加了23.4％)、骨羥脯氨酸/骨干重(增加了42.9％)及骨有機質/骨干重(增加了42.9％)(P

9、批樣品的平均值，以保留時間與黃芪甲苷峰一致的峰為參照峰，標定了9個共有指紋峰及其相對保留時間如下：1(0.0992～0.1062)，2(0.3657～0.3922)，3(0.6714～0.6832)，4(0.8412～0.8444)，5(0.8647～0.8758)，6(0.8912～0.8967)，7(0.9429～0.9492)，8(0.9526～0.9561)，9(1.2044～1.2089)，各共有指紋峰相對保留時間RSD在0.

10、11％～2.88％之間。標定的9個共有指紋峰及其相對峰面積如下：1(0.2489～0.2764)，2(0.0916～0.1073)，3(0.1032～0.1109)，4(0.1382～0.1541)，5(0.0878～0.1120)，6(0.2615～0.2948)，7(0.1125～0.1214)，8(0.1280～0.1635)，9(0.4309～0.4601)，各共有指紋峰相對峰面積的RSD在1.62％～8.15％之間。