異基因樹突狀細(xì)胞瘤苗治療肺癌的基礎(chǔ)和前臨床研究.pdf

1、第一部分目的：探討熱休克處理瘤細(xì)胞的溶解物沖擊的異基因樹突狀細(xì)胞能否誘生抗腫瘤T細(xì)胞免疫。 方法：應(yīng)用熱休克處理(43℃加熱1hr/37℃保溫3hrs)的C57小鼠來(lái)源的Lewis肺癌細(xì)胞系(LLC)制備的腫瘤溶解物(HLTCL)沖擊異基因小鼠(BALB/CKd or 615Kk)骨髓細(xì)胞衍生的樹突狀細(xì)胞(Bm-DC)作為瘤苗。應(yīng)用Western Blot 檢測(cè) HLTCL 中可誘導(dǎo) HSP70 表達(dá)。應(yīng)用體外吞噬實(shí)驗(yàn)分析小鼠I

2、mBM-DC 攝取 HLTCL 能力；藉FCM和細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒分析吞噬HLTCL對(duì)小鼠異基因 Bm-DC 表型和分泌IL-12的影響。應(yīng)用CFSE標(biāo)記DC進(jìn)行體內(nèi)示蹤試驗(yàn)，藉助FCM和共聚焦熒光顯微鏡觀察確認(rèn)受體DC對(duì)異基因DC攝取。藉細(xì)胞毒測(cè)定(LDH法)和細(xì)胞因子檢測(cè)(ELISA)分析HLTCL沖擊的異基因Bm-DC免疫接種的小鼠脾細(xì)胞殺傷LLC和產(chǎn)生Th-1相關(guān)細(xì)胞因子的能力。最后，藉C57小鼠LLC移植瘤的免疫預(yù)防和接種1天

3、的早期帶瘤鼠的治療實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)HLTCL沖擊的異基因BM-DC瘤苗的免疫效應(yīng)。 結(jié)果：1.熱休克可以明顯增加LLC-TCL 中可誘導(dǎo)Hsp70表達(dá)。2.小鼠 ImBM-DC 能充分?jǐn)z取 HLTCL。3.異基因小鼠 ImBM-DC攝取HLTCL后有促進(jìn)DC成熟的效應(yīng)(增加DC表面共刺激分子表達(dá)和促進(jìn)其IL-12分泌)。4.體內(nèi)皮下注射HLTCL沖擊的異基因小鼠Bm-DC觀察到有促進(jìn)受鼠DC攝取異基因Bm-DC的效應(yīng)。5.HLTCL 沖

4、擊的異基因Bm-DC免疫的C57BL 小鼠脾細(xì)胞能特異性殺傷活LLC，分泌Th-1相關(guān)的細(xì)胞因子(高水平IFN-γ和低水平IL-4和IL-10)。6.C57BL小鼠LLC移植瘤免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)和早期帶瘤鼠治療實(shí)驗(yàn)證實(shí)，免疫接種HLTCL 沖擊的異基因Bm-DC能夠阻止或延緩LLC腫瘤的生長(zhǎng)，其產(chǎn)生的免疫保護(hù)效應(yīng)要比HLTCL沖擊的同系DC強(qiáng)。 結(jié)論：熱休克處理瘤細(xì)胞的溶解物沖擊的異基因樹突狀細(xì)胞瘤苗接種能夠誘生抗腫瘤T細(xì)胞免疫。

5、 第二部分目的：研究低氧標(biāo)記物CA-9、HIF-1α的表達(dá)、腫瘤免疫功能有關(guān)的DC，T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、以及腫瘤壞死程度在Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌患者中的臨床和預(yù)后意義。 方法：應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)59例Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌患者的CA-9、HIF-1α、CDla、CD208、和CD3的表達(dá)。 結(jié)果：CDla、CD3 在腺癌中的表達(dá)明顯高于鱗癌；腫瘤高壞死或CA-9高表達(dá)者，其腫瘤中的CDla浸潤(rùn)都低；CD208陰性表達(dá)或腫瘤高壞死的患

6、者，其生存率明顯低于陽(yáng)性者或低壞死者；術(shù)后化療組與未化療組在生存率上未發(fā)現(xiàn)有顯著性差異，但進(jìn)一步分層分析顯示：在 CA-9 陽(yáng)性和CD208 陰性的患者中，都發(fā)現(xiàn)術(shù)后化療組的生存率短于未行化療組。 結(jié)論：非小細(xì)胞肺癌早期即有免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)，腫瘤低氧、不同病理學(xué)類型和腫瘤的壞死程度可能影響免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)；腫瘤的壞死程度和成熟DC的浸潤(rùn)程度影響患者的生存率；檢測(cè)CA-9和CD208表達(dá)可能對(duì)工期非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后是否應(yīng)該化療有指導(dǎo)