無(wú)水法制備干擾素-α-2b PLGA緩釋微球的研究.pdf

1、干擾素α(Interferon-α，IFN-α)是體內(nèi)存在的具有廣譜抗病毒、抗增值和免疫調(diào)節(jié)機(jī)能的活性蛋白質(zhì)，是最早用于臨床治療的細(xì)胞因子之一，是當(dāng)代生物藥品中基礎(chǔ)和臨床研究最為廣泛的細(xì)胞激活素。相對(duì)分子量為19KD，生物半衰期為4～16小時(shí)，在肌內(nèi)或皮下注射后3～8小時(shí)達(dá)到血漿峰濃度。靜脈、肌內(nèi)后皮下注射24小時(shí)后，干擾素在血清中濃度很低甚至檢測(cè)不到，臨床應(yīng)用中IFN-α每周至少需要注射3次才能達(dá)到有效的血漿治療濃度，這制約了其作為藥

2、品的開發(fā)和利用。 蛋白類藥物最常用的微球制備方法是復(fù)乳法，該方法工藝簡(jiǎn)單，對(duì)設(shè)備要求低，突釋作用小。課題組已做過(guò)復(fù)乳法的部分工作，但其主要缺點(diǎn)在于制備過(guò)程中形成了油水界面，以及初乳的制備過(guò)程中的苛刻條件皆易導(dǎo)致蛋白質(zhì)失活；本實(shí)驗(yàn)室研究的完全無(wú)水法(s/o/o)則可消除油水界面的存在，但需采用乙腈代替其它溶媒溶解聚合物，溶媒去除困難，而且完全無(wú)水法微球藥物突釋較大，藥物累積釋放量小。 考慮到以上因素，本文主要采用了部分無(wú)水

3、法(s/o/w)制備IFN-α-2bPLGA微球，并對(duì)其制備處方和工藝進(jìn)行了研究。本方法保持藥物活性的基本原理是脫水蛋白質(zhì)粉末在有機(jī)溶劑中惰性較強(qiáng)，限制了其構(gòu)象變動(dòng)。實(shí)驗(yàn)中首先制備了Zn2+與IFN-α-2b復(fù)合物微粉，并將Zn2+-IFN-α-2b復(fù)合物微粉包被成微球，并對(duì)微球制備過(guò)程中的影響因素進(jìn)行了考察。 首先研究了部分無(wú)水法微球的制備工藝。通過(guò)單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)考察了攪拌速率、分散相PVA溶液濃度、分散相體積、理論載藥量、P

4、LGA平均分子量和PLGA溶液濃度對(duì)微球形態(tài)、粒徑以及包封率的影響。結(jié)果表明，微球制備中的攪拌速率、PLGA平均分子量、PLGA溶液濃度和PVA溶液的濃度均對(duì)微球的粒徑有明顯影響，可以通過(guò)改變這些因素來(lái)控制微球的粒徑。當(dāng)PLGA的濃度降低、PVA濃度降低和理論載藥量降低時(shí)微球包封率增加，而攪拌速率、分散相體積和PLGA平均分子量對(duì)微球包封率影響不大。為了解決部分無(wú)水法微球包封率低的問(wèn)題，我們將理論載藥量降低至1％，將PLGA濃度增至15

5、0mg/ml，用部分無(wú)水法制得到了包封率為79.27％的IFN-α-2b微球。 以BCA(Bicinchoninicacid，二喹啉甲酸)分析法測(cè)定釋放介質(zhì)中的IFN-α-2b的濃度，考察了微球的體外釋放特性，并考察了微球的攪拌速率、分散相PVA濃度、PLGA濃度以及PLGA分子量對(duì)微球體外釋放特性的影響。 用酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)和細(xì)胞病變抑制法(CPE)分別測(cè)定了微球中和體外釋放過(guò)程中IFN-α-2b的免疫學(xué)活

6、性和生物學(xué)活性。生物學(xué)活性測(cè)定結(jié)果表明，微球制備過(guò)程對(duì)IFN-α-2b活性影響不大，在體外釋放過(guò)程中隨著釋放時(shí)間的延長(zhǎng)，微球內(nèi)和釋放介質(zhì)中的IFN-α-2b的活性明顯降低，第30天時(shí)下降至10％左右。在釋放過(guò)程中微球內(nèi)IFN-α-2b活性在第10天降至35％左右，第30天時(shí)下降至10％左右。 由于高分子材料和生物大分子藥物的特殊性，本文采用60Co輻照滅菌，考察了五個(gè)不同劑量的γ射線照射對(duì)微球和藥物性質(zhì)的影響。分別對(duì)微球外觀、聚

7、合物理化性質(zhì)、微球內(nèi)藥物活性以及微球釋放特性的影響進(jìn)行了考察，以期找到一個(gè)微球滅菌而不影響微球特性的最低劑量。實(shí)驗(yàn)表明γ射線影響微球的外觀形態(tài)，使微球的圓整性和脆度降低。經(jīng)γ-射線輻照滅菌后聚合物玻璃化溫度降低，微球突釋增加。微球經(jīng)γ-射線輻照滅菌后微球內(nèi)藥物活性均下降至1％以下，所以γ-射線輻照滅菌不適合于IFN-α-2b微球的滅菌。 結(jié)論：用可生物降解的聚合物PLGA，采用部分無(wú)水法可以將IFN-α-2b制備成緩釋一個(gè)月的微