家兔間盤細胞三維培養(yǎng)及臭氧對單層細胞的作用觀察.pdf

1、間盤源性疼痛已經(jīng)成為困擾人體健康的常見疾病，隨著認識的進一步深入，傳統(tǒng)的手術(shù)治療不再是唯一的選擇，新的治療方法、治療技術(shù)不斷涌現(xiàn)，并日臻成熟和廣泛推廣，應用于間盤源性疼痛的治療。臭氧髓核消融術(shù)是最近風靡歐洲的一種經(jīng)皮穿刺技術(shù)，具有安全、有效、損傷小、恢復快的優(yōu)點，深受醫(yī)患雙方的歡迎。并且近年來隨著組織工程學的蓬勃發(fā)展和在骨與關(guān)節(jié)軟骨缺損修復中的成功應用，人們開始嘗試用組織工程學的方法重建受損或切除的間盤。 目的： 1、本

2、實驗主要是在單層培養(yǎng)家兔間盤細胞的基礎(chǔ)之上建立三維培養(yǎng)模型，作為以后應用椎間盤組織工程學治療間盤源性疼痛的實驗基礎(chǔ)。 2、并且通過醫(yī)用臭氧(O<,3>)作用于體外培養(yǎng)家兔間盤細胞，觀察不同濃度臭氧在不同時間的作用效應，從而指導臨床治療工作。 方法： 實驗一：首先建立家兔間盤細胞體外單層培養(yǎng)系統(tǒng)，將家兔處死后取出間盤組織，采用組織消化分散法收集細胞后種植在24孔培養(yǎng)板上，在單層培養(yǎng)的家兔間盤細胞傳代后，將所有收集的

3、細胞置于一錐形瓶內(nèi)，37℃下，持續(xù)給予160rpm偏心軸旋轉(zhuǎn)，六天后，4℃下4％多聚甲醛固定，瓊脂定形后蠟塊包埋切片HE染色，光鏡下觀察。 實驗二：將單層培養(yǎng)的家兔間盤細胞制成細胞懸液，分成四組，分別給予純氧、30ug/ml醫(yī)用臭氧、60ug/ml醫(yī)用臭氧、80ug/ml醫(yī)用臭氧，分別于15分鐘和130分鐘時取細胞作臺盼藍細胞排斥試驗。 統(tǒng)計分析：采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行分析，組內(nèi)比較采用兩樣本t檢驗，組間單因素

4、方差分析。P<0.05認為具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 實驗一：三維培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，肉眼下，家兔間盤細胞呈白色沙粒樣團塊，即Pellet小體。間盤細胞蠟塊包埋HE染色后可見，細胞聚集呈現(xiàn)為細胞團，并且與單層細胞培養(yǎng)中表現(xiàn)的成纖維細胞樣梭形形態(tài)不同，呈近乎自然形態(tài)的類圓形。 實驗二：15分鐘時不同濃度醫(yī)用臭氧組間都具有統(tǒng)計學意義，并且隨著臭氧濃度的增加，活細胞率呈降低趨勢。30分鐘時統(tǒng)計結(jié)果顯示，對照組與30ug/ml醫(yī)用

5、臭氧組沒有統(tǒng)計學差別，其他各組之間都存在統(tǒng)計學差別。對照組、30ug/ml醫(yī)用臭氧組及80ug/ml醫(yī)用臭氧組在不同時間前后臺盼藍細胞排斥試驗結(jié)果無統(tǒng)計學意義；只有60ug/ml醫(yī)用臭氧組在15分鐘和30分鐘時臺盼藍細胞排斥試驗結(jié)果有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論： 采用傳統(tǒng)的離心管內(nèi)細胞團聚集培養(yǎng)方法得到的細胞小球HE染色后發(fā)現(xiàn)，表層細胞呈現(xiàn)梭形，內(nèi)部細胞比較分散，呈類圓形或者多角形；而本實驗方法發(fā)現(xiàn)在Pellet小體中細胞多數(shù)成