RNA沉默CXCR4與乳腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分shRNA-CXCR4對(duì)人乳腺癌細(xì)胞基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1受體CXCR4基因表達(dá)的影響 目的：探討shRNA-CXCR4對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s CXCR4基因表達(dá)及蛋白表達(dá)的影響。 方法：通過 shRNA-CXCR4 沉默CXCR4基因后，RT-PCR，Western-blot檢測(cè)三株人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s 的CXCR4

2、mRNA及其蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：shRNA-CXCR4作用于人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s 后能明顯抑制CXCR4基因的mRNA及蛋白表達(dá)水平(P<0.05)。 結(jié)論：shRNA-CXCR4能特異性抑制乳腺癌細(xì)胞的CXCR4mRNA及其蛋白的表達(dá)。 第二部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖活性的影響 目的：探討shRNA-CXCR4 對(duì)人

3、乳腺癌細(xì)胞株 MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s 細(xì)胞增殖活性的影響。 方法：細(xì)胞培養(yǎng)、RNA干擾技術(shù)、MTT法和流式細(xì)胞儀。 結(jié)果：MTT顯示shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯抑制人乳腺癌細(xì)胞株 MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7 的增殖(P<0.05)；流式細(xì)胞儀顯示shRNA-CXCR4 作用于CXCR4基因后S期細(xì)胞數(shù)量明顯減少(P<0.05)，將更多的

4、細(xì)胞阻滯在G<,0>/G<,1>期(P<0.05)。 結(jié)論：shRNA-CXCR4 作用于CXCR4基因后能明顯抑制人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。 第三部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因?qū)θ巳橄侔┘?xì)胞侵襲力的影響 目的：研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因?qū)θ巳橄侔┘?xì)胞侵襲潛力的影響。 方法：通過體外侵襲模型，測(cè)定人乳腺癌細(xì)胞株通過shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后穿透Matri

5、gel的潛力。 結(jié)果：shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯降低人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7穿透 Matrigel的能力(P<0.05)。 結(jié)論：shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯降低人乳腺癌細(xì)胞的侵襲潛力。 第四部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因?qū)δ[瘤血管生成潛力的影響 目的：研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因

6、對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞形成管腔能力的影響。 方法：應(yīng)用人乳腺癌細(xì)胞株與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)雙室聯(lián)合培養(yǎng)技術(shù)，觀察人乳腺癌細(xì)胞株通過shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后誘導(dǎo)HUVEC形成管腔能力的影響。 結(jié)果：shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯抑制人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7誘導(dǎo)HUVEC形成管腔樣結(jié)構(gòu)的能力(P<0.05)。 結(jié)

7、論：shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯抑制人乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)管腔形成能力。 第五部分CXOR4在乳腺癌的表達(dá)及其臨床價(jià)值 目的：研究人乳腺癌CXCR4的表達(dá)及與乳腺癌預(yù)后因子的關(guān)系。 方法：收集44例乳腺癌標(biāo)本，RT-PCR檢測(cè)CXCR4mRNA的表達(dá)，Western-blot檢測(cè)CXCR4的蛋白表達(dá)。免疫組化檢測(cè)ER，PR，C-erbB-2。 結(jié)果：CXCR4mRNA及蛋白表達(dá)與年齡、月經(jīng)

8、狀況、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、ER，PR無相關(guān)(P>0.05)；與腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，即腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≥4個(gè)的 CXCR4mRNA 及其蛋白表達(dá)水平較腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 1-3個(gè)及腋淋巴結(jié)陰性有顯著增高(P<0.05)，兩兩比較q檢驗(yàn)亦有顯著差異(P<0.05)。與C-erbB-2表達(dá)呈正相關(guān)，即C-erbB-2(++/+++)組 CXCR4mRNA 及其蛋白表達(dá)水平較C-erbB-2(-/+)組有顯著增高 (P<0.05)。 結(jié)論：