添加重組黃體生成素對(duì)助孕結(jié)局的影響及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景：
　　控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)是輔助生殖技術(shù)(assisted reproductive technique,ART)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。目前，在超排卵的過(guò)程中，普遍采用促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑（gonadotropin-releasing hormoneagoniste,GnRH-a）進(jìn)行垂體降調(diào)節(jié)，由于個(gè)體對(duì)GnRH-a的反應(yīng)存在差異，可能會(huì)引起垂體

2、降調(diào)節(jié)后黃體生成素（luteinizing hormone，LH）的過(guò)度抑制。內(nèi)源性LH水平過(guò)低對(duì)卵子質(zhì)量、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、種植率及妊娠結(jié)局等方面的負(fù)面影響已引起學(xué)者們的關(guān)注。有研究認(rèn)為對(duì)于LH過(guò)度抑制者應(yīng)適當(dāng)?shù)难a(bǔ)充外源性的LH，將提高獲卵數(shù)、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及種植率等。目前，對(duì)于是否需要添加及如何添加外源性LH一直存在爭(zhēng)議。
　　對(duì)于添加外源性 LH能夠提高實(shí)驗(yàn)室及臨床的指標(biāo)已被越來(lái)越多的研究證實(shí)，但其可能的機(jī)制卻沒(méi)有得到

3、進(jìn)一步的研究和闡明。LH主要與 LH/HCG受體結(jié)合，發(fā)揮其生物學(xué)活性。研究發(fā)現(xiàn)不同種類(lèi)動(dòng)物的輸卵管、子宮內(nèi)膜、子宮肌層和子宮頸，LH受體的釋放呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)特征，表明 LH在發(fā)情周期和胚胎種植的分子自分泌一旁分泌調(diào)節(jié)中可能具有重要的作用。文獻(xiàn)報(bào)道LH/HCG受體廣泛分布于生殖系統(tǒng)中，在不同發(fā)育階段的卵泡細(xì)胞、黃體細(xì)胞和子宮內(nèi)膜細(xì)胞及胚胎上均有表達(dá)，提示LH可能在生殖的各個(gè)環(huán)節(jié)中均起到重要的作用。近期研究發(fā)現(xiàn)在早卵泡期開(kāi)始添加低劑量人絨毛膜

4、促性腺激素（human chorionic hyperstimulation，HCG）可引起血清LH/HCG受體的表達(dá)增強(qiáng)。研究還發(fā)現(xiàn)在拮抗劑促排卵過(guò)程中早期添加小劑量的HCG,其第3天胚胎培養(yǎng)液β-HCG的濃度增加，認(rèn)為在COH中加入HCG可能通過(guò)影響卵泡膜細(xì)胞上的LH受體及顆粒細(xì)胞上的受體表達(dá),從而影響卵子核、漿、膜的最終同步化，影響其胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌β-HCG的功能,通過(guò)自分泌調(diào)節(jié)的作用,起到增加胚胎質(zhì)量的效果，推測(cè)可能是導(dǎo)致優(yōu)

5、胚數(shù)增加的原因。研究顯示激活子宮肌層的LH/HCG受體，可導(dǎo)致子宮肌層舒張，有利于體內(nèi)胚胎的植入。胚胎分泌的HCG與子宮內(nèi)膜細(xì)胞上LH/HCG受體的相互作用構(gòu)成了母-胎界面的基本對(duì)話，HCG與 LH/HCG受體結(jié)合后促進(jìn)白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的生成，抑制白細(xì)胞介素6（interleu

6、kin,IL-6）的生成，降低母-胎界面的免疫殺傷作用，誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜蛻化，有利于胚胎的植入。
　　LH和HCG有著相同的受體和相似的生物學(xué)與免疫學(xué)特性。因此促排卵過(guò)程中添加 LH后促進(jìn)卵子的最終成熟，是否也會(huì)出現(xiàn)胚胎自分泌 HCG的能力增強(qiáng)呢？這是否也是導(dǎo)致優(yōu)胚數(shù)增加的可能原因之一呢？胚胎自分泌HCG的能力增強(qiáng)，是否加強(qiáng)母-胚界面的對(duì)話，進(jìn)而提高種植潛能呢？著床期母體血液中胚胎源性HCG是否能夠檢測(cè)出，與妊娠結(jié)局有何關(guān)系？這些問(wèn)題

7、至今并未得以完全闡明。
　　本課題首先探討垂體不同抑制程度及卵泡發(fā)育不同時(shí)期添加重組黃體生成素（recombinant luteinizinghormone,r-LH）在促排卵中的作用及其對(duì)妊娠結(jié)局的影響，為臨床選擇個(gè)體化用藥方案提供理論依據(jù)。通過(guò)比較添加r-LH組和未添加r-LH組卵泡液、第3天胚胎培養(yǎng)液、移植后第5天血清中β-HCG的水平，分析其與妊娠結(jié)局的關(guān)系，以便進(jìn)一步探討r-LH在人類(lèi)促排卵及胚胎發(fā)育種植中的作用，影響受

8、精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率等的可能機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　研究?jī)?nèi)容：
　　第一部分長(zhǎng)方案促排卵過(guò)程中添加重組黃體生成素對(duì)助孕結(jié)局的影響目的
　　評(píng)價(jià)重組黃體生成素在體外受精-胚胎移植促排卵治療中的作用及其對(duì)妊娠結(jié)局的影響。
　　方法：
　　回顧性分析2013年1月至2013年12月期間在廣東省婦幼保健院生殖中心行IVF-ET或ICSI助孕的490個(gè)周期。根據(jù)垂體降調(diào)節(jié)后即啟動(dòng)日血清LH水平

9、分為兩大組（血LH<1.2 U/L組及血LH≥1.2U/L組）。根據(jù)卵泡發(fā)育不同時(shí)期添加r-LH將兩大組分為不同的亞組（未添加組、早期添加組、中期添加組及晚期添加組）。比較兩組不同亞組間及不同兩組相同亞組間的基本臨床資料、促排卵方案資料及臨床結(jié)局等。
　　結(jié)果：
　　1．啟動(dòng)日血LH<1.2 U/L組各亞組間結(jié)果的比較
　　各亞組間基本資料兩兩進(jìn)行比較，年齡、基礎(chǔ)FSH、LH、E2及基礎(chǔ)竇卵泡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0

10、.05）。超促排卵情況的比較，早期添加組HCG日E2水平最高，與未添加組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HCG日LH水平早期添加組最低，中期添加組最高，兩組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；早期添加組Gn時(shí)間最長(zhǎng)，與晚期添加組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；內(nèi)膜厚度晚期添加組最薄，與中期添加組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；各亞組間獲卵數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。助孕結(jié)局的比較，未添加組優(yōu)質(zhì)胚胎率

11、最低，且與早期添加組及晚期添加組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與未添加組相比，其他三組種植率、臨床妊娠率均呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，中期添加組臨床妊娠率最高，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；早期添加組妊娠早期丟失率最高，與其他三組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2．啟動(dòng)日血LH≥1.2U/L組各亞組間結(jié)果比較
　　各亞組間基本資料兩兩進(jìn)行比較，年齡、基礎(chǔ)FSH、LH、E2及基礎(chǔ)竇卵泡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>

12、0.05）。超促排卵情況的比較，HCG日LH水平，中期添加組最高，與未添加組及晚期添加組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；中期添加組子宮內(nèi)膜厚度最薄，與未添加組及晚期添加組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；晚期添加組Gn時(shí)間最長(zhǎng)，與未添加組相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；各亞組間獲卵數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。助孕結(jié)局的比較，晚期添加組2PN受精率最低，與中期添加組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）

13、。
　　3．不同兩組相同亞組間結(jié)果的比較
　　不同兩組相同亞組間基本資料兩兩進(jìn)行比較，年齡、基礎(chǔ)FSH、LH、E2及基礎(chǔ)竇卵泡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。超排卵情況的比較，中期添加亞組間進(jìn)行對(duì)比，前者HCG日LH水平低于后者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；晚期添加亞組間進(jìn)行對(duì)比，前者HCG日LH水平低于后者，子宮內(nèi)膜厚度較后者薄，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），前者Gn用量少于后者、Gn時(shí)間短于后者，差異均

14、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。助孕結(jié)局的比較，未添加亞組間，前者優(yōu)質(zhì)胚胎率低于后者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），2PN受精率、種植率、臨床妊娠率均低于后者，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。中期添加亞組進(jìn)行比較，2PN受精率及優(yōu)質(zhì)胚胎率前者均低于后者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．對(duì)于長(zhǎng)方案垂體降調(diào)節(jié)后LH過(guò)度抑制的患者，補(bǔ)充r-LH可以獲得較高的優(yōu)質(zhì)胚胎率，從而改善種植率及臨床妊娠率，在