腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子鞘注緩釋納米粒研制及治療馬尾神經(jīng)綜合征的效果研究.pdf

1、本文以乳酸-羥基乙酸共聚物為載體,研究制備了可供硬脊膜鞘內(nèi)注射用的腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子緩釋納米制劑,并對(duì)它的理化特征,體內(nèi)外釋藥行為及藥效學(xué)進(jìn)行了較為深入的探討,同時(shí)建立了馬尾神經(jīng)損傷模型,進(jìn)一步對(duì)外源性的鞘注腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子緩釋納米粒對(duì)犬馬尾神經(jīng)損傷的修復(fù)作用進(jìn)行了研究。 在納米粒制備方法的研究中,采用了復(fù)乳(w/o/w)法的制備方法,以納米粒形態(tài)、粒徑及其分布、納米粒載藥量、藥物包封率、納米粒收率及納米粒的體外釋放等作為含藥納米粒的

2、質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo),對(duì)結(jié)果進(jìn)行了二因素的星點(diǎn)設(shè)計(jì),以判斷各種因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響；在此基礎(chǔ)上,根據(jù)三維效應(yīng)面圖,選擇突釋小且累積釋放多的值,綜合考慮,優(yōu)選處方并制備出各項(xiàng)指標(biāo)性質(zhì)優(yōu)良的納米粒制劑。 光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察納米粒狀態(tài)、外觀形態(tài)、表面狀態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。納米粒呈規(guī)則球形,分散性和流動(dòng)性均較好,表面光滑,不粘連,內(nèi)部為實(shí)心結(jié)構(gòu)。差示掃描量熱法和X-射線衍射分析結(jié)果表明腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子被有效地包埋在PLGA納米粒中,分散在聚合物骨

3、架中,具有良好的緩釋納米粒的結(jié)構(gòu)特征。用氣相色譜法測(cè)定納米粒中二氯甲烷殘留量,測(cè)定結(jié)果為43.43±1.48ppm,符合規(guī)定要求。 腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子緩釋納米粒體內(nèi)外釋放特性研究中,以pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)為釋放介質(zhì),測(cè)定納米粒釋放速率,結(jié)果表明,納米粒體外釋藥行為符合Higuchi方程。通過(guò)鞘注將納米粒注射入犬背脊馬尾神經(jīng)區(qū)域,預(yù)定時(shí)間測(cè)定腦脊液內(nèi)腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子活性含量,考察腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子緩釋納米粒體內(nèi)釋放速率。結(jié)果表明

4、,納米粒體內(nèi)釋藥行為符合Higuchi方程。以納米粒在pH7.4磷酸鹽緩沖液中(X)和體內(nèi)(Y)釋放量數(shù)據(jù)按時(shí)間配對(duì),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程：Y=1.0225X+5.9701,r=0.9872,兩者相關(guān)性極顯著(a=0.01),納米粒體內(nèi)外釋藥行為具有良好相關(guān)性。通過(guò)多重馬尾束縊(Multiple cauda equina constrictions,MCEC)模型并最終導(dǎo)致馬尾綜合征(Cauda equina syndrome,CE

5、S)的實(shí)驗(yàn)研究,建立馬尾神經(jīng)損傷模型。應(yīng)用腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子緩釋納米粒,通過(guò)形態(tài)學(xué)、組織學(xué)觀察,電鏡染色掃描,神經(jīng)功能評(píng)價(jià),組織學(xué)半定量評(píng)分,骶神經(jīng)功能綜合測(cè)定,性功能勃起綜合測(cè)定,并采用免疫組化方法對(duì)體內(nèi)的BDNF表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè),考察腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子緩釋納米粒的體內(nèi)神經(jīng)修復(fù)作用。結(jié)果顯示,腦神經(jīng)生長(zhǎng)因子緩釋納米粒能夠有效修復(fù)體內(nèi)馬尾神經(jīng)組織。 使用顯微鏡觀察組織切片法,考察納米粒體內(nèi)生物相容性。在1～28天時(shí)間內(nèi),空白納米粒與腦神