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文檔簡介
1、氟尼辛為動物專用的非甾體抗炎藥(NSAIDs),在獸醫(yī)臨床上常用其葡甲胺鹽(FM),主要通過抑制花生四烯酸合成鏈中的環(huán)氧化酶,來減少前列腺素和血栓烷素等炎性介質(zhì)的生成,而有效地緩解機體的發(fā)熱、疼痛和炎癥。
EMEA和FDA相繼規(guī)定了豬可食組織中氟尼辛的最大殘留限量,而中國卻未制定其MRL。同時,國內(nèi)外針對豬可食組織中氟尼辛殘留量的檢測方法報道的很少,且方法存在重現(xiàn)性差、操作繁瑣、靈敏度低等缺陷。隨著FM在畜牧生產(chǎn)中的廣泛使用,
2、從食品安全角度考慮,建立一種可靠的豬可食組織中氟尼辛殘留量的檢測方法是非常有必要的。
本研究目的是建立一種可靠、快速、靈敏的UPLC-MS/MS檢測方法,應(yīng)用于豬可食組織(肌肉、皮脂、肝臟、腎臟)、血漿、尿液、糞便中氟尼辛殘留量檢測,同時將該方法應(yīng)用于氟尼辛在豬體內(nèi)殘留消除試驗和代謝試驗的研究。主要研究結(jié)果如下:
1.豬可食組織中氟尼辛殘留檢測方法的建立
建立了一種可靠、快速、靈敏的UPLC-MS/MS方法
3、用于豬肌肉、皮脂、肝臟、腎臟組織中氟尼辛的殘留檢測。本實驗選用乙酸乙酯-乙腈(1∶1,V/V)對組織中的待測物進行提取,Oasis MCX固相萃取柱凈化,Acquity UPLC BEH C18色譜柱梯度洗脫,肉標(biāo)法定量。在電噴霧正離子模式(ESI+)下選擇多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式進行分析。方法在豬肌肉、皮脂、肝臟、腎臟組織中的檢測限(LOD)和定量限(LOQ)分別為0.5μg·kg-1和1μg·kg-1;在1~200μg·kg-1濃度
4、范圍內(nèi),峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系(R2>0.999);待測物的回收率為73.7~124.3%,日內(nèi)精密度及日間精密度<17.8%。
2.豬血漿、尿液、糞便中氟尼辛殘留檢測方法的建立
建立了一種可靠、快速、靈敏的UPLC-MS/MS方法用于豬血漿、尿液、糞便中氟尼辛的殘留檢測。本實驗選用乙腈對血漿進行提取;乙腈-2%磷酸溶液(1∶4,V/V)對尿液進行提取,Oasis MCX固相萃取柱凈化;乙酸乙酯-乙腈(1∶1,
5、V/V)對糞便進行提取,Oasis MCX固相萃取柱凈化,Acquity UPLC BEH C18色譜柱梯度洗脫,內(nèi)標(biāo)法定量。該方法在血漿中的LOD和LOQ分別為0.25μg·L-1和0.5μg·L-1;尿液中分別為0.25μg·L-1和0.5μg·L-1;糞便中分別為0.5μg·kg-1和1.0μg·kg-1。在0.5~500μg·kg-1(或μg·L-1)濃度范圍內(nèi),峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系(R2>0.999);待測物的回收率分
6、別為68.9~118.6%,日內(nèi)精密度及日間精密度<18.3%。
3.氟尼辛在豬可食組織中殘留消除試驗研究
27頭健康豬被隨機分為5個給藥組(每組5頭)和1個空白對照組(1公1母),給藥組豬按2.2 mg·kg-1(以氟尼辛計)的劑量肌肉注射FM注射液,一日一次,連續(xù)給藥3天,空白對照豬不做處理。在最后一次給藥后第0.5、6、11、16、23天各屠宰5頭給藥豬,第7天屠宰2頭空白對照豬,收集組織樣品,勻漿后保存。使用
7、已建立的UPLC-MS/MS檢測方法,進行消除試驗研究。結(jié)果表明:本研究建立的UPLC-MS/MS檢測方法成功地用于豬可食組織中氟尼辛殘留消除研究。健康豬注射給以氟尼辛,在最后一次給藥后第16天,各種組織中的氟尼辛濃度都低于最大殘留限量(MRL);在第23天時幾乎檢測不到該藥物。對本試驗得到的數(shù)據(jù)采用休藥期計算軟件WT1.4計算的豬肌肉、皮脂、肝臟、腎臟、注射位點肌肉、注射位點皮脂組織的休藥期分別為5.15d、23.37 d、9.78
8、d、19.70 d、18.72 d、26.76 d。
4.氟尼辛在豬體內(nèi)代謝試驗研究
9頭健康豬被隨機分為1個給藥組(4公3母)和1個空白對照組(1公1母),給藥組豬按2.2 mg·kg-1(以氟尼辛計)的劑量肌內(nèi)注射FM注射液,一日一次,連續(xù)給藥3天,空白對照豬不做處理。收集血漿、尿液、糞便樣品,混勻后保存。使用已建立的UPLC-MS/MS檢測方法,測定血液、尿液、糞便中的氟尼辛的殘留量,進行代謝試驗研究。結(jié)果顯示
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