生物材料對(duì)神經(jīng)類細(xì)胞培養(yǎng)和生長(zhǎng)分化的影響.pdf

1、組織工程是應(yīng)用工程學(xué)和生命科學(xué)原理，研究和開發(fā)能夠修復(fù)和改善損傷組織結(jié)構(gòu)與功能的生物替代物的一門學(xué)科。它已經(jīng)成為當(dāng)今最熱點(diǎn)的研究之一，而生物材料作為組織工程學(xué)重要要素之一，已經(jīng)越來越受到重視。本論文對(duì)兩種生物材料聚乳酸羥基乙酸(PLGA)和聚乙二醇(PEG)水凝膠分別表面加工處理，研究其對(duì)神經(jīng)類細(xì)胞的培養(yǎng)和分化生成神經(jīng)細(xì)胞的影響，主要包括PLGA對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，對(duì)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)及分化為神經(jīng)細(xì)胞的影響;PEG水凝膠對(duì)誘導(dǎo)多功能干

2、細(xì)胞(IPS)分化生成神經(jīng)細(xì)胞的影響。為神經(jīng)組織工程的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。本論文所做的工作有:
　　(1)分離昆明白小鼠的神經(jīng)原代細(xì)胞，培養(yǎng)并純化，為生物材料表面對(duì)細(xì)胞黏附生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞源并作對(duì)照組。通過甲苯胺藍(lán)染色和免疫熒光抗體染色實(shí)驗(yàn)，證明成功分離出昆明白小鼠的神經(jīng)元細(xì)胞。
　　(2)分離原代小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，并成功對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，傳代，凍存及復(fù)蘇，通過絲裂霉素處理后，為誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞(IPS)培養(yǎng)做滋養(yǎng)層。結(jié)果表明

3、在滋養(yǎng)層上可以良好的培養(yǎng)IPS細(xì)胞，多次傳代，凍存，復(fù)蘇后仍具有良好的細(xì)胞形態(tài)。
　　(3)以PLGA顆粒為基材，探究了PLGA薄膜的制備技術(shù)，制備了PLGA薄膜，堿處理后通過衰減全反射傅立葉轉(zhuǎn)換紅外(ATR-FTIR)波譜掃描測(cè)定其表面有羧基，然后采用碳化二亞胺(EDC-NHS)兩步接枝法將多聚賴氨酸和不同濃度的神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)固定化到PLGA薄膜上，再分別用神經(jīng)原代細(xì)胞和神經(jīng)嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12)細(xì)胞株在處理后的PLGA

4、薄膜上分別進(jìn)行培養(yǎng)和誘導(dǎo)。通過羅丹明B對(duì)接枝蛋白前后的PLGA薄膜的標(biāo)記處理，輔助于熒光染色照片和MTT法檢測(cè)，對(duì)薄膜表面細(xì)胞的粘附情況和分化情況進(jìn)行直觀的描述。結(jié)果證明多聚賴氨酸和NGF因子都固定化到了PLGA薄膜上，并對(duì)原代細(xì)胞的培養(yǎng)和PC12細(xì)胞的誘導(dǎo)具有積極的作用。
　　(4)使用分子量為2000的分子兩端有雙鍵的PEG大單體聚乙二醇雙丙烯酸酯(PEGDA)為原料，通過紫外光聚合技術(shù)制備出的PEG水凝膠薄膜，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求設(shè)

5、計(jì)制備了轉(zhuǎn)移試劑ACRL-PEG2000-RGDS，并利用此轉(zhuǎn)移試劑和二次光聚合技術(shù)把黏附因子多肽RGDS接枝到PEG水凝膠薄膜上，使改性后的PEG水凝膠薄膜具有細(xì)胞黏附能力。通過MTT數(shù)據(jù)檢測(cè)了改性后PEG水凝膠薄膜對(duì)PC12細(xì)胞的活性的影響。
　　(5)制備分子量為2000的PEG水凝膠，二次光聚合把RGDS和NGF接枝到PEG水凝膠薄膜上，通過對(duì)IPS細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)，特異性鑒定后證明在PEG水凝膠上接枝誘導(dǎo)因了使IPS細(xì)胞向