閏黃素促HaCaT細(xì)胞調(diào)亡機(jī)理及對小鼠銀屑病治療研究.pdf

1、姜黃素是從姜科植物姜黃(Curcuma longa)中提取的一種酚類化合物，是植物界很稀少的具有二酮的色素。姜黃素能夠通過抑制多種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的磷酸化，如蛋白激酶A、蛋白激酶C、精蛋白激酶、磷酸化酶激酶、自身磷酸化活性蛋白激酶以及pp60c-src酪氨酸激酶等，影響細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，表現(xiàn)出多樣化的生物學(xué)作用，包括影響轉(zhuǎn)錄因子、酶、細(xì)胞因子和生長因子等，從而展現(xiàn)多重藥理活性，如促進(jìn)凋亡，抗增生，抗氧化，抗炎，抗腫瘤和抗血管增生等作

2、用。
　　 姜黃素不溶于水，可應(yīng)用的靜脈給藥方法至今未見報(bào)道。國內(nèi)外目前已有的臨床研究資料都是以口服給藥為途徑。但是姜黃素的生物利用度之低卻另人失望。在一項(xiàng)姜黃素Ⅰ期臨床研究中，口服3.6g/天的劑量也僅僅能夠產(chǎn)生11.1±0.6 nmol/L的血漿峰濃度，而低于此劑量則未檢測到姜黃素。鑒于以上原因，雖然眾多關(guān)于姜黃素的體內(nèi)外研究已明確其藥理作用，但是它極低的生物利用度嚴(yán)重制約了對其應(yīng)用研究的腳步。
　　 銀屑病是臨床常

3、見的皮膚病，發(fā)病率占世界人口的0.1％～3％。因該病頑固難治，仍被列為當(dāng)今世界皮膚科領(lǐng)域的重要研究課題，是全世界皮膚科重點(diǎn)防治疾病之一。雖然銀屑病的發(fā)病機(jī)理目前尚未完全明了，但越來越多的證據(jù)已經(jīng)證明IL-23→IL-17→IL-22作用鏈以及其他細(xì)胞因子在疾病的發(fā)展中起了至關(guān)重要的作用。銀屑病皮損區(qū)皮膚在基因與蛋白水平均可檢測到IL-23，IL-21，IL-22和IL-17的高表達(dá)，并且IL-23可在小鼠皮膚誘發(fā)與人類銀屑病類似的病變特

4、征，如紅斑，表皮增生（棘皮征），角化不全和白細(xì)胞浸潤，同時真皮層的炎癥與棘皮征被認(rèn)為與細(xì)胞因子IL-22有關(guān)，此過程還需趨化因子受體CCR6的參與。IL-23誘導(dǎo)的皮膚炎癥主要通過IL-17及其下游相關(guān)細(xì)胞因子實(shí)現(xiàn)的。除了上述提及的細(xì)胞因子以外，尚有TNF-α，IL-1α，IL-1β，IL-6，IL-8，VEGF，TGF-β等參與銀屑病的病理生理過程。
　　 銀屑病參與的細(xì)胞因子眾多，牽涉到的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)更是十分龐雜?，F(xiàn)在已知的涉及

5、到NF-κB激活的細(xì)胞因子有IL-17A，IL-17F，TNF-α，IL-6等。姜黃素多靶點(diǎn)的作用機(jī)制與銀屑病復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)有諸多的疊加之處，如抑制NF-κB激活、抑制STAT3磷酸化等?？紤]到姜黃素在銀屑病治療中潛在的應(yīng)用價值，著眼于銀屑病病變部位的淺表特點(diǎn)，本研究通過驗(yàn)證姜黃素對其靶細(xì)胞——KC細(xì)胞的藥理作用基礎(chǔ)上，通過局部給藥的方式（規(guī)避姜黃素口服給藥難以在銀屑病靶細(xì)胞產(chǎn)生有效濃度的難題），通過小鼠銀屑病動物模型評估姜黃素局部

6、給藥的治療效果，為后續(xù)的應(yīng)用研究打下堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 我們的研究發(fā)現(xiàn):TRAIL及其受體在姜黃素誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡中起重要作用，此作用包括TRAIL-R1和TRAIL-R2表達(dá)的上調(diào)以及凋亡抑制蛋白BcL-XL，IAP-1，IAP-2表達(dá)的抑制。以上證據(jù)說明TRAIL及其受體通路在姜黃素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用中占有重要地位。此外姜黃素還能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的NF-kB的激活，并減少炎癥因子IL-6和IL-8的分泌。這無

7、疑使其具備了理想的，對抗銀屑病中TNF-α作用的潛力。借鑒以往的研究基礎(chǔ)，在原有配方的基礎(chǔ)上，引入了另外的透皮促進(jìn)劑:氮酮，并適當(dāng)調(diào)整了組方的比例，成功配制出了符合實(shí)驗(yàn)研究需要、穩(wěn)定、能夠強(qiáng)效促透的姜黃素凝膠制劑。以此制劑為基礎(chǔ)，我們驗(yàn)證評估了姜黃素對咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的實(shí)驗(yàn)治療效果，結(jié)果令人振奮。咪喹莫特小鼠銀屑病模型最早于2009年見諸報(bào)道，是迄今為止最能夠最大程度模擬銀屑病發(fā)病機(jī)理的模型。我們發(fā)現(xiàn)姜黃素可以抑制咪喹莫特導(dǎo)

8、致的皮膚增厚和炎癥反應(yīng);顯著抑制咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病模型小鼠耳廓皮膚的IL-17A，IL-17F， IL-22，IL-1β，TNF-a和IL-6的mRNA水平的上升。并且還發(fā)現(xiàn)，姜黃素可能會抑制咪喹莫特誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)小鼠真皮γδ T細(xì)胞的增殖，而這一細(xì)胞被認(rèn)為在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中占有重要地位。
　　 本研究在細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動物水平上系統(tǒng)的探討了姜黃素對于銀屑病治療的機(jī)理和效果評估，并為實(shí)現(xiàn)這一研究目標(biāo)對姜黃素的外用凝膠制劑進(jìn)行了研究和改