五種結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白的純化及其血清學(xué)特性的研究.pdf

1、目的：分離純化五種結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白(30-kDa,38-kDa，ESAT-6，Rv3872 and HBHA)，比較這五種蛋白及三種聯(lián)合蛋白(38-kDa-30-kDa Ag,38-kDa-ESAT-6 Ag,38-kDa-HBHA Ag)的免疫學(xué)特性,并評價(jià)其在結(jié)核病血清學(xué)診斷方面的應(yīng)用價(jià)值。為開發(fā)新型結(jié)核分枝桿菌診斷性試劑，提供理論依據(jù)。
　　方法：應(yīng)用硫酸銨鹽析作用、疏水作用和陰離子交換作用從結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)濾過液中分

2、離純化30-kDa和38-kDa蛋白；應(yīng)用金屬螯合NI2+-NTA瓊脂親和層析作用從結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)濾過液中分離純化 ESAT-6、Rv3872和 HBHA蛋白。在肺結(jié)核患者和正常對照組血清中，利用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，評價(jià)五種結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白及其三種聯(lián)合蛋白的免疫原性。
　　結(jié)果：成功分離純化了5種分泌性蛋白。并且在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中，38-kDa抗原與其他四種結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白比較，具有較強(qiáng)的敏感性和特異性，尤其在抗

3、 IgM抗體的誘導(dǎo)免疫反應(yīng)最強(qiáng)(p＜0.0001)，其敏感性和特異性分別為44.44％和95%。而在38-kDa與30-kDa聯(lián)合抗原中敏感性高達(dá)80%，并且也具有較高的特異性。結(jié)果還顯示出，ESAT-6抗原和肝素結(jié)合血凝黏附素(HBHA)抗原，在與三種抗體的反應(yīng)中，具有相似的敏感性與特異性。Rv3872抗原比其他四種抗原的敏感性和特異性均低。
　　結(jié)論：1.作為結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白單一抗原，38-kDa抗原的免疫原性優(yōu)于其他四