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文檔簡(jiǎn)介
1、橘皮為蕓香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培變種的果皮,因不同生長(zhǎng)期采收而成為(陳皮和青皮)兩味功效存在差異的中藥,即成為兩味“同源不同性、一體二用”的中藥。在臨床功效上:陳皮長(zhǎng)于理氣健脾;青皮長(zhǎng)于疏肝破氣。而兩者在成分、藥效等諸多方面存在共性,由于兩者采摘時(shí)生長(zhǎng)時(shí)間不同,所致的主要活性成分有差異,進(jìn)而使兩藥在作用部位、作用強(qiáng)度等方面各有特性。即兩者在主成分含量、比例上差異較大,導(dǎo)致其藥效差異及在作用上亦各
2、具特點(diǎn)。
目前研究表明,植物的次生代謝產(chǎn)物大多具有生理活性,亦為主要活性成分,是植物藥產(chǎn)生藥效的重要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。而這些主要活性成分的合成及積累受其自身遺傳因素制約以及環(huán)境因子的影響,為了避免遺傳因素及環(huán)境影響,故在研究中定同一植株、定產(chǎn)地來采集樣品。而不同生長(zhǎng)期橘果皮主要活性成分的組成、含量及相對(duì)比例未有系統(tǒng)深入研究;以及對(duì)定植株不同生長(zhǎng)期采集的橘果皮化學(xué)成分動(dòng)態(tài)變化比較研究亦未有系統(tǒng)深入報(bào)道。同時(shí),對(duì)影響陳皮、青皮兩藥功效
3、差異的關(guān)鍵因素未闡明,且同一植株不同生長(zhǎng)期成分動(dòng)態(tài)變化與藥效相關(guān)尚未有研究。因此,研究?jī)伤幉煌L(zhǎng)期在組成分含量差異,將為闡釋影響兩藥功效差異的物質(zhì)基礎(chǔ)提供理論依據(jù)。
本研究以陳皮、青皮為研究對(duì)象,為了排除環(huán)境影響及自身遺傳因素對(duì)次生代謝產(chǎn)物的合成及積累的影響,本文特地以定同一植株、定產(chǎn)地來研究橘皮藥材,對(duì)橘皮(6月至次年2月,每半月采摘一次)進(jìn)行了從植株掛果到果實(shí)成熟的次生代謝產(chǎn)物研究,以主要活性成分黃酮類、酚酸類、生物堿、
4、揮發(fā)油等為指標(biāo),首次系統(tǒng)研究了同一植株橘皮整個(gè)生長(zhǎng)期內(nèi)主要活性化學(xué)成分動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,為陳皮、青皮的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系的完善提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),為進(jìn)一步分析橘皮次生代謝產(chǎn)物積累變化規(guī)律與其功效的相關(guān)性奠定基礎(chǔ)。
研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
1.橘皮不同采收期主要活性成分比較研究
對(duì)橘皮不同生長(zhǎng)期黃酮類成分、總酚酸、生物堿、揮發(fā)油的含量變化進(jìn)行了對(duì)比分析,以期為研究橘皮次生代謝產(chǎn)物積累變化規(guī)律與其功效的相關(guān)性奠定基礎(chǔ),為闡釋中藥
5、陳皮、青皮藥材“一體二用”的科學(xué)內(nèi)涵提供示范。
1.1黃酮類成分
橘皮藥材中所含黃酮類成分主要以橙皮苷、蕓香柚皮苷、川陳皮素、橘皮素等為主,該類成分有抗炎、抗病毒、抗癌、抗氧化及心血管保護(hù)等作用,本研究采用HPLC建立了雙波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)定橘皮藥材中4種黃酮苷的方法;同時(shí)采用紫外-可見分光光度計(jì)建立了測(cè)定橘皮藥材中總黃酮含量的方法,共測(cè)定了45批藥材。結(jié)果表明:橘皮中總黃酮的含量從7月份幼果期的16.55%遞減至12月份成
6、熟期的10.37%;蕓香柚皮苷從幼果期的0.85%降至成熟期的0.17%;橙皮苷從幼果期的10.58%降至成熟期的5.25%;而川陳皮素和橘皮素的含量呈現(xiàn)先增加后降低的變化趨勢(shì)。即青皮和陳皮的黃酮類成份含量有差異的,該結(jié)果為研究陳皮、青皮兩藥的差異提供理論依據(jù)。
1.2總酚酸
文獻(xiàn)報(bào)道,酚酸類成分具有抗氧化、抗自由基、有抗癌、抗炎癥和抗血小板凝聚等功能,以及能抑制低密度脂蛋白的氧化、預(yù)防心血管疾病的作用。本研究參考《
7、中國(guó)藥典》2010年版附錄X B項(xiàng)下鞣質(zhì)含量測(cè)定方法,共測(cè)定了45批藥材,首次系統(tǒng)比較分析同一植株橘果皮不同生長(zhǎng)期藥材中總酚酸含量變化規(guī)律。結(jié)果表明:橘皮中總酚酸的含量從7月份幼果期的6.454%遞減至12月份成熟期的3.801%,該研究結(jié)果為以橘皮中以總酚酸來研究陳皮、青皮兩藥的差異提供理論依據(jù)。
1.3生物堿類成分
橘皮中所含的辛弗林具有有收縮血管、升高血壓、擴(kuò)張氣管和支氣管等作用,本文采用HPLC建立了測(cè)定橘皮
8、藥材中辛弗林含量的方法,共測(cè)定了45批藥材。結(jié)果表明:橘果皮從幼果期到成熟期,辛弗林的含量均呈現(xiàn)遞減的變化趨勢(shì),辛弗林含量從0.95%降至0.39%。7月份幼果期采摘的橘皮中辛弗林的含量較在12月份成熟期之后采摘的橘果皮高。7~9月份為橘果實(shí)的果實(shí)膨大期,幼果期、果實(shí)膨大期的橘皮辛弗林的含量顯著高于成熟期的橘皮,結(jié)果與課題組前期研究青皮辛弗林的含量高于陳皮一致。該方法簡(jiǎn)便、高效,可為陳皮、青皮藥材、飲片及含有橘皮中成藥的質(zhì)量控制研究提供
9、參考。
1.4揮發(fā)油
橘皮中揮發(fā)油為主成分之一,檸檬烯、松油醇、松油烯具有抗癌、抗菌活性。本研究采用 HS-SPME/GC/MS建立了橘皮中揮發(fā)性成分含量測(cè)定方法,結(jié)果共鑒定出36個(gè)化合物,各批次含量按面積歸一化法分別為88.26%,84.1%,92.25%,93.74%,91.41%,88.59%,88.79%,91.04%,96.53%,85.68%,81.93%,86.93%,85.49%。其中主要成分為檸檬烯
10、、芳樟醇、r-萜品烯、α-法呢烯、百里香酚含量較高。以樣品 JM3為例,含量最高的化合物為檸檬烯,達(dá)31.70%,其次為芳樟醇達(dá)17.29%,以化學(xué)型來劃分其屬于檸檬烯/芳樟醇類。不同生長(zhǎng)期的橘皮揮發(fā)油含有相同的物質(zhì)成分,各成分在含量上有差異,r-萜品烯在橘皮生長(zhǎng)期中有規(guī)律性的變化。該方法簡(jiǎn)便、高效,可為含揮發(fā)性成分的芳香辛味中藥的成分研究提供理論依據(jù)。
以上結(jié)果表明,從幼果期到成熟期,橘果皮中總黃酮、生物堿、總酚酸、橙皮苷、
11、蕓香柚皮苷、辛弗林的含量均呈現(xiàn)遞減的變化趨勢(shì);川陳皮素、橘皮素的含量呈現(xiàn)先增加后降低。橘皮中的揮發(fā)油含有相同的物質(zhì)成分,但各成分在含量上有一定差異,還需進(jìn)一步研究分析。該研究結(jié)果為研究陳皮、青皮的藥效差異提供了理論依據(jù)。
2.橘葉及橘皮4種黃酮的初步比較研究
橘葉、橘皮同源而不同部位入藥,橘葉具有疏肝、消腫散結(jié)的作用。本研究采用HPLC建立了橘葉中4種黃酮苷含量測(cè)定方法,比較了橘葉、橘皮不同生長(zhǎng)期4種黃酮?jiǎng)討B(tài)變化規(guī)律
12、,共測(cè)定了30批次藥材。
2.1橘葉不同生長(zhǎng)期4種黃酮初步比較研究
測(cè)定同植株橘葉不同生長(zhǎng)期4種黃酮,結(jié)果發(fā)現(xiàn),橘葉中的橙皮苷在8月份果實(shí)膨大期含量最高(4.283%);同時(shí)橘葉所含的橙皮苷、蕓香柚皮苷、川陳皮素、橘皮素4種成分從幼果期、膨大期及成熟期亦有規(guī)律變化,其含量先增加后降低。
2.2橘葉與橘皮4種黃酮初步比較研究
測(cè)定了同植株橘葉、橘皮不同生長(zhǎng)期4種黃酮,結(jié)果發(fā)現(xiàn)7月份幼果期采集的橘葉S
13、Y1的4種成分均低于橘皮S1的含量;在12月份成熟期采集的橘葉SY7樣品中橙皮苷的含量低于同一期采集的橘皮 S7,而其他3種黃酮成分蕓香柚皮苷、川陳皮素及橘皮素的含量未有顯著差異。本研究為同源的橘葉、橘皮兩藥藥效及功效差異的物質(zhì)基礎(chǔ)提供理論依據(jù)。
3.HPLC指紋圖譜比較研究
3.1不同生長(zhǎng)期橘皮HPLC指紋圖譜比較研究
目前,主要以橙皮苷含量作為陳皮藥材的質(zhì)量控制指標(biāo),而單一的橙皮苷含量不能全面反映陳皮的
14、質(zhì)量,HPLC指紋譜在體現(xiàn)化學(xué)成分類型、物種間的差異及質(zhì)量控制方面可發(fā)揮重要作用。本文采用HPLC方法首次對(duì)同一植株橘果皮甲醇提取物的指紋圖譜進(jìn)行比較研究,運(yùn)用國(guó)家藥典委員會(huì)發(fā)布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A版)”分析圖譜。結(jié)果表明,橘果皮不同生長(zhǎng)期指紋圖譜差異較小,相似度均大于0.95,說明其所含主要化學(xué)成分種類相近。結(jié)合相對(duì)峰面積分析,發(fā)現(xiàn)8批橘皮各成分比例相差較大,辛弗林在幼果期的相對(duì)峰面積值大于果實(shí)成熟期的相對(duì)峰
15、面積;川陳皮素和橘皮素的相對(duì)峰面積從幼果期到成熟期,其變化趨勢(shì)為先增加后逐漸降低。這一結(jié)果與上述化學(xué)成分含量測(cè)定結(jié)果一致。
3.2不同柑橘品種HPLC指紋圖譜比較研究
橘皮為蕓香科柑橘屬 C. Blanco及其栽培變種的果皮,有紅橘 C. Hort. et Tanaka(大紅袍品系)、茶枝柑C. chachiensis Hort.、四會(huì)柑C. suhoiensis Hort. ex Tanaka等,其中《中國(guó)藥典》2
16、010年版收載橘的變種主要有:福橘C. tangerina Hort、朱橘 C. erythrosa Tanaka、溫州蜜橘 C. unshiu Marcoritch.、黃巖蜜橘 C. subcompressa Tanaka。本文采集了10批不同品種柑橘皮樣品,分別為紅橘、椪柑、沙蜜橘、天草一號(hào)、蜜橘、蜜園30、甌柑、茶枝柑、福橘及南豐蜜,其中紅橘、茶枝柑、福橘為藥典收載品種。本文采用HPLC方法對(duì)不同品種柑橘皮的甲醇提取物指紋圖譜進(jìn)行
17、比較研究,運(yùn)用國(guó)家藥典委員會(huì)發(fā)布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A版)”分析圖譜。直觀分析圖譜,椪柑、沙蜜橘、天草一號(hào)、蜜橘及甌柑與紅橘對(duì)照指紋的相對(duì)峰面積的比例有顯著的差異。茶枝柑、福橘及南豐蜜橘與紅橘對(duì)照譜圖對(duì)比,發(fā)現(xiàn)相似度上很接近,但在各個(gè)成分間比例有差異。聚類分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)紅橘、椪柑、沙蜜橘、茶枝柑、福橘、南豐蜜橘為一大類,天草一號(hào)、蜜園30、甌柑為一類,蜜橘單獨(dú)為一類。
4.不同貯藏年限廣陳皮中辛弗林及總
18、黃酮含量比較研究
廣陳皮為陳皮中質(zhì)量最優(yōu)的藥材,為闡釋在貯藏養(yǎng)護(hù)過程在總黃酮類及生物堿的化學(xué)成分上的變化規(guī)律,以期為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。本文以廣陳皮為研究對(duì)象,采用 HPLC建立了藥材中辛弗林的含量測(cè)定方法,采用紫外-可見分光光度計(jì)建立了藥材中總黃酮含量測(cè)定方法,測(cè)定了21批次藥材。結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),廣陳皮總黃酮類成分的含量有降低的趨勢(shì);辛弗林的含量從0.273%降至0.1097%,即隨貯藏時(shí)間的增加有降低的趨勢(shì)
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