用免疫印跡(Western blot)技術(shù)檢測水稻中的白葉枯病菌.pdf

1、水稻是世界上最重要的糧食作物之一，白葉枯病是危害水稻最為嚴重的細菌性病害，在過去的十幾年中，多個水稻抗白葉枯病基因以及白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，Xoo)的無毒基因的被克隆，水稻及Xoo的全基因組測序也已經(jīng)完成，所以水稻-白葉枯病菌互作體系是植病研究的重要模式系統(tǒng)，建立并優(yōu)化白葉枯病菌的檢測方法具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。免疫印跡(Western blot，WB)技術(shù)有使用方便、特異性強、靈敏

2、度高、假陽性率低等特點，在植物和動物病原物檢測中有重要的實用意義。
　　本研究以Xoo全蛋白質(zhì)為免疫原，制備了Xoo多克隆抗體，該抗體能夠識別所有受檢的Xoo小種，沒有Xoo小種特異性，與水稻、稻瘟病菌和大腸桿菌樣品沒有交叉反應(yīng)，所制備的抗體具有Xoo特異性。本研究建立了檢測Xoo的WB技術(shù)，檢測下限約為3500個Xoo細胞，并且WB信號與Xoo的量在一定范圍內(nèi)有線性關(guān)系。水稻接種Xoo菌后5-7天表型可見水稻感病，在本實驗中，用

3、WB方法檢測Xoo，在人工接種Xoo后第一天，即可檢測到水稻中的Xoo，在接種后第2天，即可檢測到抗感反應(yīng)中Xoo數(shù)量的顯著區(qū)別。在水稻-Xoo不親和反應(yīng)中，接種后10天，Xoo僅存在于接種部位附近(6cm)的范圍內(nèi)，在水稻-Xoo親和反應(yīng)中，接種后10天，可在接種部位12cm范圍內(nèi)檢測到Xoo，而在距離接種部位更遠的葉片和非接種葉片中，均不能檢測到Xoo信號，說明抗病水稻品種對Xoo的繁殖具有更強的抑制作用。
　　免疫學技術(shù)為檢