皮質(zhì)類固醇性股骨頭壞死發(fā)病機(jī)制與早期干預(yù)研究.pdf

1、目的：應(yīng)用分離純化的人股骨頭骨微血管血管內(nèi)皮細(xì)胞(HLlman bonemicrovascular endothelial cell，HBMEC)在體外建立糖皮質(zhì)激素?fù)p傷的細(xì)胞模型，并利用這一細(xì)胞模型篩選對(duì)激素引起HBMEC損害具有保護(hù)作用的藥物。 方法：應(yīng)用UEA-1結(jié)合的磁珠分離和純化HBMEC并進(jìn)行鑒定；在體外建立糖皮質(zhì)激素殺傷HMEC的細(xì)胞模型模型;用MTT法、臺(tái)盼藍(lán)染色及TLINEL方法確定細(xì)胞損傷的類型．比較分析不同

2、SARS患者血清對(duì)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的HBMEC損害的影響；應(yīng)用RT-PCR、Western Blot和免疫組化方法檢測(cè)SARS-CoV相關(guān)受體ACE2及CD209L在HBMEC的表達(dá)。比較評(píng)價(jià)不同藥物PGE1、7643(丹參提取的單體)、那曲肝素、依諾肝素、丹參、川芎嗪、大蒜素等對(duì)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的HBMEC損害的保護(hù)作用． 結(jié)果；應(yīng)用UEA-1磁珠分離純化的HBMEC表現(xiàn)單層生長(zhǎng)和接觸抑制的特性；免疫熒光染色證實(shí)這些細(xì)胞表達(dá)VWF

3、，CD31，CD34并攝取低密度脂蛋白．將HBMEC與不同劑量的糖皮質(zhì)激素共同孵育，可以直接導(dǎo)致HBMEC損傷，并表現(xiàn)明顯的劑量和時(shí)間依賴性．這些損傷的細(xì)胞可以被臺(tái)盼藍(lán)染色而TUNEL染色陰性，表明細(xì)胞壞死是損傷主要類型．SARS患者血清單獨(dú)不對(duì)HBMEC造成損傷，但可明顯增加HBMEC對(duì)糖皮質(zhì)激素的殺傷敏感性．免疫細(xì)胞化學(xué)和Western Blot證實(shí)：HBMEC表達(dá)兩種SARS病毒受體ACE2和CD209L應(yīng)用糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)HBME