熊果酸經(jīng)ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制星型膠質(zhì)細(xì)胞瘤及血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的分子機(jī)制.pdf

1、目的：通過觀察熊果酸（Ursolic acid，UA）對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1表達(dá)的影響，以及熊果酸對膠質(zhì)瘤裸鼠移植瘤生長和對膠質(zhì)瘤裸鼠移植瘤ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1和CD34的影響，探討熊果酸抗膠質(zhì)瘤生長的機(jī)制。 方法：1.體外培養(yǎng)HUVEC，用熊果酸和PD98059處理HUVEC48h，以及熊果酸按濃度梯度（0、31.5、62.5、1

2、25、250、500ug/ml）處理HUVEC24h和125ug/ml按時(shí)間梯度（0、12、24、48h）處理HUVEC，然后通過RT-PCR檢測ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1 mRNA水平，Western blot檢測ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1蛋白表達(dá)情況。2.皮下移植術(shù)復(fù)制膠質(zhì)瘤裸鼠皮下移植瘤模型，然后將其分為三組：熊果酸組（熊果酸50mg.kg-1.d-1，腹腔注射，連續(xù)用藥20天）

3、；PD98059組（PD980592mg.kg-1.d-1，腹腔注射，連續(xù)用藥7天）；空白對照組（生理鹽水0.2ml.d-1，腹腔注射，共20天）。用免疫組化技術(shù)檢測移植瘤組織ERK1、C-Jun、C-Myc、Cyclin D1和CD34蛋白表達(dá)變化；用原位雜交技術(shù)觀察ERK1 mRNA表達(dá)變化。 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示，經(jīng)熊果酸和PD98059處理后，HUVEC中ERK1、C-Jun、C-Myc、Cyclin D1 mRN

4、A表達(dá)水平都有明顯減弱，且熊果酸不同濃度、不同時(shí)間處理HUVEC后，HUVEC中ERK1、C-Myc、C-Jun和Cyclin D1 mRNA表達(dá)隨熊果酸濃度增加和時(shí)間的增加逐漸減少（p<0.05）；Western blot結(jié)果表明，熊果酸和PD98059處理后，HUVEC中ERK1、C-Jun、C-Myc、Cyclin D1蛋白表達(dá)也有不同程度下調(diào)，熊果酸處理后ERK1、C-Jun、C-Myc、Cyclin D1蛋白表達(dá)下調(diào)程度呈濃度

5、一時(shí)間依賴性（（p<0.05）；免疫組化顯示，經(jīng)熊果酸和PD98059處理后的惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6裸鼠移植瘤中ERK1、C-Jun、C-Myc、CyclinDl和CD34蛋白表達(dá)比空白對照組明顯減少；原位雜交結(jié)果顯示，熊果酸組和PD98059組ERK1 mRNA表達(dá)水平比對照組顯著減少； 結(jié)論：熊果酸可抑制HUVEC中ERK1、C-Jun、C-Myc、Cyclin D1mRNA和蛋白表達(dá)，呈濃度-時(shí)間依賴性（p<0.05）；熊果