若干補(bǔ)腎與益氣中藥對大鼠哮喘模型的作用與機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　應(yīng)用若干補(bǔ)腎益氣中藥淫羊藿、補(bǔ)骨脂、黃芪及太子參干預(yù)SD大鼠哮喘模型，明確補(bǔ)腎和益氣中藥對哮喘氣道炎癥的干預(yù)作用和作用環(huán)節(jié)，包括對致炎和抑炎因素的雙向調(diào)節(jié)作用，特別是對免疫和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)（hypothalamic-pituitary-adrenocortical，HPA）軸系統(tǒng)相關(guān)的環(huán)節(jié);進(jìn)一步探討補(bǔ)腎和益氣中藥對哮喘氣道高反應(yīng)性及氣道重塑的作用及其機(jī)制。
　　方法：
　　1.將150只SD大鼠

2、按隨機(jī)數(shù)字法分為15組，每組10只，即正常對照組(Normal)、哮喘模型組(OVA)、地塞米松干預(yù)組(Dex)、淫羊藿苷低、中、高劑量干預(yù)組(Epi2.5、5.0、10.0)、補(bǔ)骨脂低、中、高劑量干預(yù)組(PF2.5、5.0、10.0)、黃芪低、中、高劑量干預(yù)組(AM2.5、5.0、10.0)、太子參低、中、高劑量干預(yù)組(PS2.5、5.0、10.0)。
　　2.用卵蛋白致敏和霧化激發(fā)的方式建立哮喘模型。
　　3.采用Bux

3、co氣道阻力和肺順應(yīng)性有創(chuàng)檢測系統(tǒng)測定氣道高反應(yīng)。
　　4.采用HE染色觀察肺組織炎癥變化，PAS染色觀察肺組織氣道粘液分泌變化，Masson三色染色觀察氣道壁周圍膠原沉積變化。病理圖像分析氣道炎癥程度、氣道粘液分泌程度，以及氣道壁周圍膠原沉積面積。
　　5.采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測肺泡灌洗液和血清中INF-γ、 IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α和TGF-β1的水平變化。
　　6.采用流式

4、流式細(xì)胞術(shù)檢測肺泡灌洗液Treg細(xì)胞比例。
　　7.采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中ACTH和CORT的變化。
　　8.采用realtime PCR法測定下丘腦CRHmRNA的變化。
　　9.采用免疫印跡法測定下丘腦組織Bax、Bcl-2、Fas、FasL、Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)。
　　10.采用TUNEL法測定下丘腦、垂體、腎上腺組織細(xì)胞凋亡變化。
　　結(jié)果：
　　1.肺功能測試顯示

5、模型組大鼠氣道阻力(RL)較正常組顯著升高，而肺順應(yīng)(Cdyn)性顯著下降（P＜0.05）。與模型組比較，地塞米松可顯著改善肺功能（P＜0.05）。一定劑量的淫羊藿、補(bǔ)骨脂、黃芪可不同程度降低氣道阻力，改善肺順應(yīng)性(P＜0.05)。而太子參各劑量組大鼠氣道阻力、肺順應(yīng)性與模型組比較均無顯著差異（P＞0.05）。
　　2.肺組織HE染色氣道炎癥評分結(jié)果顯示，哮喘模型組氣道炎癥指數(shù)顯著提高，與正常大鼠相比具有顯著差異（P＜0.05）。

6、地塞米松可顯著抑制氣道炎癥，淫羊藿中、高劑量組，補(bǔ)骨脂高劑量組，黃芪中、高劑量組均可顯著抑制大鼠氣道炎癥（P＜0.05）。而淫羊藿低劑量組，補(bǔ)骨脂低、中劑量組，黃芪低劑量組，太子參低、中、高劑量組均不能有效抑制氣道炎癥(P＞0.05)。
　　3.肺組織PAS染色結(jié)果顯示，哮喘模型組黏液分泌顯著增加，與正常組比較有顯著區(qū)別（P＜0.05）。地塞米松組氣道粘液分泌顯著降低，淫羊藿中、高劑量組，補(bǔ)骨脂高劑量組，以及黃芪中、高劑量治療組氣

7、道粘液分泌量較模型組顯著下降（P＜0.05）。而淫羊藿低劑量組，補(bǔ)骨脂低、中劑量組，黃芪低劑量組，太子參低、中、高劑量組均不能有效緩解氣道粘液分泌（P＞0.05）。
　　4.肺組織Masson三色染色結(jié)果顯示，哮喘模型組氣道壁周圍膠原面積顯著增加，與正常組比較有顯著差異（P＜0.05）。地塞米松組氣道壁周圍膠原面積較模型組顯著下降（P＜0.05）。淫羊藿低、中、高劑量組，以及黃芪低、中、高劑量組氣道周圍膠原沉積面積較模型組顯著降低

8、（P＜0.05），而補(bǔ)骨脂低、中、高劑量組，太子參低、中、高劑量組與模型組比較無顯著差異（P＞0.05）。
　　5.與正常大鼠相比，哮喘模型組大鼠肺泡灌洗液細(xì)胞因子INF-γ水平顯著下降，而IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β1和TNF-α水平顯著升高（P＜0.05）。地塞米松可顯著降低IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β1水平（P＜0.05）。一定劑量的淫羊藿能顯著降低肺泡灌洗液中IL-4、IL-5和IL-13水平（

9、P＜0.05），一定劑量的補(bǔ)骨脂能顯著降低肺泡灌洗液中IL-4與IL-13水平，一定劑量的黃芪能顯著升高肺泡灌洗液INF-γ水平，降低IL-4、IL-5、IL-13和TGF-β1水平（P＜0.05）;太子參各劑量組肺泡灌洗液上述細(xì)胞因子均無顯著變化（P＞0.05）。
　　6.與正常大鼠相比，哮喘模型組較正常組血清INF-γ水平顯著下降，IL-10水平顯著升高(P＜0.05)，而IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、TNF-α和

10、TGF-β1水平無明顯差異(P＞0.05)。一定劑量淫羊藿顯著升高哮喘大鼠模型血清INF-γ水平，降低TGF-β1和TNF-α水平(P＜0.05);一定劑量的補(bǔ)骨脂可顯著降低血清TGF-β1水平（P＜0.05）;一定劑量的黃芪高劑量顯著升高哮喘模型組血清INF-γ水平，降低血清TGF-β1水平（P＜0.05）;一定劑量太子參組可顯著降低哮喘模型組血清TGF-β1水平（P＜0.05）。
　　7.與正常組大鼠比較，哮喘模型組CD4+C

11、D25+Foxp3+調(diào)節(jié)T細(xì)胞有下降趨勢，但無顯著區(qū)別（P＞0.05）。與模型組相比，地塞米松組，黃芪中及高劑量組CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)T細(xì)胞比例顯著升高（P＜0.05）。而淫羊藿、補(bǔ)骨脂及太子參低、中、高劑量組CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)T細(xì)胞比例與模型組比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　8.與正常組大鼠比較，哮喘模型組大鼠血清ACTH及CORT均無顯著差異（P＞0.05）。與模型組比較，地塞米松組、淫羊藿

12、、補(bǔ)骨脂、黃芪及太子參低、中、高劑量組CORT和ACTH均無顯著差異（P＞0.05）。
　　9.與正常組大鼠比較，哮喘模型組大鼠下丘腦CRHmRNA水平顯著下降(P＜0.05)。與模型組比較，地塞米松組下丘腦CRHmRNA水平與模型組比較有下降趨勢，但無顯著差異（P＞0.05）。淫羊藿高劑量組CRHmRNA水平有升高趨勢，但無顯著差異（P＞0.05）;而淫羊藿低、中劑量及補(bǔ)骨脂、黃芪、太子參低、中、高劑量下丘腦CRHmRNA含量與

13、模型組比較均無顯著差異（P＞0.05）。
　　10.哮喘模型組下丘腦組織促凋亡信號通路分子Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.05），而Bcl-2/Bax比值降低（P＜0.05）。一定劑量的淫羊藿、補(bǔ)骨脂、黃芪及太子參可降低Fas蛋白表達(dá)（P＜0.05），但均不能抑制Bax、Fas-L及Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)（P＞0.05），也不能提高Bcl-2蛋白表達(dá)及Bcl-2/Bax表達(dá)比

14、值（P＞0.05）。
　　11.與正常組比較，哮喘模型組下丘腦、垂體及腎上腺組織切片細(xì)胞凋亡指數(shù)無顯著差異（P＞0.05）。與模型組比較，地塞米松組腎上腺皮質(zhì)和下丘腦細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著增加（P＜0.05），而淫羊藿、補(bǔ)骨脂、黃芪及太子參組與模型組比較，細(xì)胞凋亡指數(shù)均無顯著差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.補(bǔ)腎中藥淫羊藿對哮喘有顯著的干預(yù)作用，可改善哮喘氣道炎癥、氣道高反應(yīng)及氣道重塑。淫羊藿改善氣道炎癥的作用與抑

15、制Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-5和IL-13水平密切相關(guān)，此外，淫羊藿尚有提高CRHmRNA水平，改善HPA軸作用的趨勢，這可能也是其抗炎機(jī)制。補(bǔ)腎中藥補(bǔ)骨脂對氣道炎癥和氣道高反應(yīng)也有一定的改善作用，其作用可能與降低Th2炎性因子IL-4和IL-13相關(guān)。淫羊藿與補(bǔ)骨脂相比較，同為補(bǔ)腎中藥，淫羊藿對哮喘的干預(yù)作用顯著優(yōu)于補(bǔ)骨脂。
　　2.益氣中藥黃芪對哮喘有顯著的干預(yù)作用，可改善哮喘氣道炎癥、氣道高反應(yīng)及氣道重塑。黃芪改善氣道

16、炎癥的作用可能與抑制Th2型細(xì)胞因子水平，以及增加調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例相關(guān)。益氣中藥太子參對哮喘氣道炎癥、氣道高反應(yīng)及氣道重塑無顯著干預(yù)作用。黃芪與太子參相比較，同為益氣中藥，黃芪對哮喘的干預(yù)作用顯著優(yōu)于太子參。
　　3.補(bǔ)腎中藥淫羊藿和益氣中藥黃芪相比較，兩者均可顯著改善哮喘氣道高反應(yīng)性，抑制氣道炎癥，但淫羊藿尚有提高CRHmRNA水平，改善HPA軸作用的趨勢，而黃芪尚能增加調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量。故淫羊藿可能具有調(diào)節(jié)免疫和HPA軸的雙重