IL-1β聯(lián)合TNF-α預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)血管細(xì)胞黏附分子-1的表達(dá)及改善缺血后心功能.pdf

1、研究背景：心肌缺血損傷后,心肌細(xì)胞釋放大量炎癥介質(zhì)作為對(duì)心肌損傷的應(yīng)答,梗死及缺血區(qū)的炎癥因子有助于心肌組織對(duì)損傷的修復(fù)和適應(yīng)。多種炎癥因子刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以激活一系列的生物學(xué)過程,包括激活干細(xì)胞的旁分泌,從而增強(qiáng)移植后干細(xì)胞生物學(xué)功能及提高移植的干細(xì)胞對(duì)心梗后心功能的保護(hù)作用。
　　目的：研究炎癥因子白介素-1β(IL-1β)與腫瘤壞死因子-α(TNF-α)預(yù)處理對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)的遷移黏附能力的影響,對(duì)其

2、表達(dá)血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)及移植于缺血心肌后對(duì)心梗后大鼠左室心功能的影響。并且探究?jī)梢蜃勇?lián)合預(yù)處理是否可以增強(qiáng)這一作用。
　　方法：體外遷移實(shí)驗(yàn)中用將對(duì)照及不同處理處的細(xì)胞置于transwell小室的上層,下層培養(yǎng)液中加入不同處理組對(duì)應(yīng)的細(xì)胞因子,共培養(yǎng)12小時(shí)后檢測(cè)遷移至小室下層的細(xì)胞數(shù)目。用IL-1β(10ng/ml,20mg/ml)、TNF-α(10ng/ml,20mg/ml)、IL-1β(10ng/ml)+T

3、NF-α(10ng/ml)預(yù)處理BMMSCs,對(duì)照組不添加任何因子,以上各不同處理組的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。24 h后,消化細(xì)胞進(jìn)行體外黏附實(shí)驗(yàn),將細(xì)胞調(diào)整濃度后重懸接種于細(xì)胞板,靜置后洗去未黏附的細(xì)胞,拍照計(jì)數(shù)粘附的細(xì)胞數(shù)目。流式細(xì)胞檢測(cè)中消化收集細(xì)胞并用PE-VCAM-1染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)VCAM-1的表達(dá)。提取細(xì)胞RNA后逆轉(zhuǎn)錄及擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)照組及處理組細(xì)胞的VCAM-1的mRNA的表達(dá)變化。細(xì)胞加熱變性后,Western-blo

4、t實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的VCAM-1在蛋白平上的表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)按如上分組移植BMMSCs于梗死邊緣區(qū),4周后二維超聲心動(dòng)圖檢測(cè)大鼠收縮舒張末期左室內(nèi)徑大小及左室射血分?jǐn)?shù),冰凍切片檢測(cè)移植后心肌內(nèi)DAPI染色的干細(xì)胞核,Masson染色檢測(cè)心肌內(nèi)膠原的表達(dá)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比,IL-1β及TNF-α預(yù)處理明顯增加的BMMSCs的遷移黏附能力,并且細(xì)胞因子預(yù)處理明顯增加了干細(xì)胞的VCAM-1在基因及蛋白水平上的表達(dá),同時(shí)移植細(xì)胞因子

5、預(yù)處理的干細(xì)胞明顯減小了心肌梗死后大鼠左室收縮及舒張末期左室內(nèi)徑的增大,同時(shí)改善了大鼠的心功能(P<0.01)。用20ng/ml處理干細(xì)胞與10ng/ml組相比,細(xì)胞的遷移黏附能力均有所增強(qiáng),VCAM-1的在基因及蛋白水平上增加,大鼠的射血分?jǐn)?shù)也不同程度增加,但是這些增加沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而 IL-1β及 TNF-α的低劑量聯(lián)合處理組在細(xì)胞的遷移黏附能力及VCAM-1表達(dá)上明顯高于20ng/ml組,同時(shí)大鼠左室心功能也顯著