Mdrl的定量檢測及多藥耐藥相關基因的研究.pdf

1、目的:在LightCycler PCR儀上對多藥耐藥基因(mdrl)定量測定的方法和臨床應用進行探討,通過對耐藥/非耐藥急淋患者差異表達基因的篩選來探索多藥耐藥的分子病理機制,并對部分功能明確的基因在耐藥中的作用進行驗證.方法:在LightCycleR PCR儀上建立了熒光定量逆轉錄-多聚酶鏈反應檢測多藥耐藥基因(mdrl)的技術方法,并應用該方法檢測了30例急性白血病患者和8例正常人外周血mdrl基因的表達.根據(jù)mdrl基因表達水平并

2、結合臨床將6例急淋分為耐藥組和非耐藥組,每組各3人,用含有4096個人類已知基因的cDNA表達譜芯片檢測兩組之間差異表達的基因,并選擇其中高表達的細胞周期蛋白B1基因,根據(jù)Genbank中所查人細胞周期蛋白B1和β-actin基因組序列,分別設計兩對引物,應用半定量逆轉錄-多聚酶鏈反應檢測了14例耐藥急性白血病患者和13例非耐藥急性白血病患者外周血細胞周期蛋白B1基因的表達水平.結果:利用熒光定量逆轉錄-多聚酶鏈反應檢測mdrl的實驗方

3、法標準曲線線性良好(r=1.0),耐藥組mdrl基因拷貝數(shù)與非耐藥組有顯著性差異(P<0.01),正常人亦有低水平mdrl基因的表達.基因芯片兩次重復檢測顯示耐藥組較之非耐藥組共出現(xiàn)了150個差異表達基因,其中有83個基因低表達,67個基因高表達,這些差異表達的基因涉及到生命活動的諸多方面,如細胞生長、細胞周期、細胞凋亡、離子轉運、細胞間信息傳導等.RT-PCR半定量結果顯示耐藥組與非耐藥組相比,細胞周期蛋白B1基因表達水平有顯著性升高

4、.結論:熒光逆轉錄-多聚酶鏈反應是一種可靠的定量方法,能迅速、特異地檢測腫瘤標本中的mdrl,為臨床化療用藥、預防MDR發(fā)生、考核逆轉MDR效果等提供了有價值的量化指標;采用cDNA芯片有助于平行、高通量地篩選細胞多藥耐藥相關基因,可為多藥耐藥的分子病理機制研究提供新的手段;細胞周期、細胞凋亡相關基因表達異?？赡苁嵌嗨幠退幍姆肿硬±頇C制之一,細胞周期蛋白B1基因可作為判斷AL患者耐藥的指標,對判斷AL的預后具有一定的價值.mdrlm