采用DIGE方法對(duì)人類不育和高生育能力精子的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：以高生育力和不育精子為研究對(duì)象，通過(guò)差異熒光二維電泳技術(shù)（DIGE）和質(zhì)譜技術(shù)尋找和建立兩種精子差異蛋白圖譜，并對(duì)某些關(guān)鍵性的蛋白進(jìn)行功能分析，以期揭示導(dǎo)致精子生育能力低下的分子以及細(xì)胞調(diào)控的機(jī)制。 材料和方法：收集在精子庫(kù)里連做15個(gè)AID周期一次也未能成功的供精者的精液和AID成功率在50％以上的供精者的精液，各10人。每人捐獻(xiàn)3次。所有志愿者都簽署了供精知情同意書(shū)。 運(yùn)用Percoll密度梯度離心技術(shù)分離精子

2、，硫脲/尿素法結(jié)合超聲法提取蛋白，2-D DIGE技術(shù)進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組分離。將高生育力精子和低生育力精子分別用Cy3，Cy5熒光染料標(biāo)記，各取兩樣本的一半混合作為內(nèi)標(biāo)用Cy2標(biāo)記。為了獲得有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異蛋白點(diǎn)，再將兩樣本反向標(biāo)記進(jìn)行2D-DIGE。圖像經(jīng)過(guò)DeCyder差異分析軟件進(jìn)行分析。結(jié)合膠內(nèi)酶解和質(zhì)譜鑒定技術(shù)對(duì)分析出的差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行身份鑒定。 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)采用了熒光差異二維電泳（DIGE）對(duì)不同生育能力精子蛋白進(jìn)行分