晚期糖化終產(chǎn)物通過p38MAPK、JNK、NF-κB途徑促進T淋巴細胞分泌TNF-a.pdf

1、目的：研究表明晚期糖化終產(chǎn)物(AGEs)與糖尿病加速動脈粥樣硬化(AS)形成有密切關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)AGEs可影響內(nèi)皮細胞、單核巨噬細胞、平滑肌細胞表達炎癥因子，使細胞功能紊亂，參與AS的形成。而AGEs對T細胞功能影響的研究較少，T細胞的激活與炎癥因子的表達在AS的形成中起重要作用，本實驗研究AGEs對人類T細胞白血病細胞株Jurkat細胞(CD4+T細胞)表達炎癥因子TNF-a的影響及其信號機制，進一步了解糖尿病動脈粥樣硬化形成的機制。

2、
　　 方法：①常規(guī)方法制備AGEs，不同濃度AGEs與牛血清白蛋白(BSA)作用于PHA(0.25μg/ml)預刺激48h后的Jurkat細胞24h，MTT法檢測AGEs對細胞生長的影響；②不同濃度AGEs與BSA作用于PHA(0.25μg/ml)預刺激48h后的Jurkat細胞24h，ELISA法檢測AGEs與BSA對Jurkat細胞分泌炎癥因子TNF-a的影響；③適當濃度的AGEs(200μg/ml)作用于PHA(0.25

3、μg/ml)預刺激48h后的Jurkat細胞0、10、20、30、40min，Western-blot檢測AGEs對p38、JNK、Akt磷酸化及非磷酸化水平的影響。④Western-blot檢測信號通路阻滯劑及N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)對IκB磷酸化與非磷酸化水平的改變情況。⑤ELISA方法觀察信號通路阻滯劑及NAC對AGEs刺激Jurkat細胞分泌TNF-a的影響。
　　 結(jié)果：①不同濃度AGEs與BSA作用于PHA預

4、處理的Jurkat細胞24h后，MTT法檢測結(jié)果顯示各濃度AGEs與BSA對Jurkat細胞生長均無明顯影響(p＞0.05)。②不同濃度AGEs與BSA作用于PHA預處理的Jurkat細胞24h后，ELISA法檢測結(jié)果顯示AGEs(100～400μg/ml)可促進Jurkat細胞上調(diào)炎癥因子TNF-a表達(p＜0.01)。③200μg/ml的AGEs作用于預處理的Jurkat細胞0～40min后，Western-blot結(jié)果顯示AGEs

5、可上調(diào)p-p38、p-JNK表達，20～30min時作用明顯，對p-Akt無明顯影響。④200μg/ml的AGEs作用于預處理的Jurkat細胞30min可明顯上調(diào)p-IκB表達，p38、JNK抑制劑和NAC能明顯抑制AGEs上調(diào)p-IκB。⑤p38、JNK抑制劑和NAC能明顯抑制AGEs上調(diào)炎癥因子TNF-a。
　　 結(jié)論：AGEs可促進PHA預處理的Jurkat細胞分泌炎癥因子TNF-a，其機制與激活p38、JNK，上調(diào)p-