強的松對IFN-γ體外誘導腎病綜合征患兒PBMC HLA的調(diào)控及其機制研究.pdf

1、本文研究目的：通過研究強的松對IFN-γ體外誘導INS患兒、正常人PBMC HLA表達的影響及對正常人PBMC C ⅡTA轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)，旨在從分子水平和基因水平探討糖皮質(zhì)激素對HLA的調(diào)控作用及其調(diào)控機制，為其臨床治療提供實驗依據(jù)。 研究方法： 1.INS患兒PBMC經(jīng)過IFN-γ聯(lián)合PHA刺激誘導活化，用不同濃度強的松干預(yù)，采用流式細胞術(shù)檢測其PBMC組成性、活化后和強的松處理前后HLA-DR7、Ⅰ類/Ⅱ類分子的表達量并

2、與正常對照組進行分析比較。 2.用強的松干預(yù)經(jīng)IFN-γ聯(lián)合PHA刺激誘導活化的正常人PBMC，采用RT-PCR的方法擴增其CⅡTA mRNA，并對處理后PBMC CⅡTA轉(zhuǎn)錄水平與未活化的組成性及活化后的誘導性CⅡTA轉(zhuǎn)錄水平進行分析比較。 研究結(jié)果： 1.強的松對INS患兒PBMC HLA表達影響的結(jié)果。 (1)體外培養(yǎng)INS患兒及正常人PBMC均組成性表達HLA(平均熒光強度HLA-Ⅰ：113.33

3、±2.08、68.53±3.39：HLA-Ⅱ：26.87±0.78、2.28±0.12；HLA-DR7：7.77±0.55、6.97±0.74，P值均<0.01)，但INS患兒高于正常人(尤以HLA-Ⅱ類分子突出，為正常人的11.78倍)。 (2)經(jīng)IFN-γ聯(lián)合PHA活化后HLA-Ⅰ/Ⅱ類分子和DR7分子表達增加(平均熒光強度HLA Ⅰ：187.33±0.58、158.00±17.35；HLA Ⅱ：41.10±0.46、5.2

4、7±0.38；HLA-DR7：13.33±1.53、10.87±1.41，P值均<0.01)。 (3)經(jīng)不同濃度強的松(10<'-4>M、10<'-6>M、10<'-8>M)處理后，HLA-Ⅰ/Ⅱ>類分子和DR7分子比活化后表達減少(平均熒光強度分別為HLA-Ⅰ：157.33±8.62、138.67±15.53和159.67±2.51、142.00±3.46及169.33±4.72、147.00±5.29；HLA-Ⅱ類為35.4

5、3±3.72、3.48±0.19和36.40±5.40、3.33±0.21及36.47±0.67、3.22±0.24；HLA-DR7為9.45±0.38、6.43±0.76和9.28±0.34、6.59±0.77及9.51±0.41、6.40±0.43；P值均<0.01)。 (4)經(jīng)不同濃度強的松(10<'-4>M、10<'-6>M、10<'-8>M)預(yù)處理后，與活化組比較HLA-Ⅰ/Ⅱ類分子和HLA-DR7表達減少(平均熒光強

6、度分別是122.00±3.60、114.33±8.73和125.67±2.31、121.33±8.02及127.33±4.93、123.67±5.77；HLA-Ⅱ類為21.17±0.40、3.57±0.28和23.13±1.53、3.75±0.26及26.10±0.40、3.85±0.17；HLA-DR7為7.76±0.22、7.65±1.16和8.39±0.54、7.53±0.24及8.01±0.74、7.70±0.50，P值均<0.

7、01)，強的松對INS患兒的抑制率要高于正常人，并且HLA-Ⅱ類分子表達的抑制作用表現(xiàn)出劑量依賴性(P<0.01)，隨著強的松濃度的增高，抑制效應(yīng)增強。 2.強的松對PBMC CⅡTA轉(zhuǎn)錄影響的結(jié)果：體外培養(yǎng)的正常人PBMC組成性表達CⅡTA，經(jīng)IFN-γ聯(lián)合PHA活化后表達增加，強的松干預(yù)后，表達量明顯減少。 研究結(jié)論： 1.INS患兒PBMC在未活化狀態(tài)下即有大量HLA-Ⅰ/Ⅱ類分子和一定水平的HLA-DR7