細胞表面β1，6分支糖鏈對小鼠乳腺癌細胞4TO7轉移相關細胞行為學的影響及其對遷移影響的機制探討.pdf

1、細胞癌變時癌細胞膜上糖蛋白的寡糖鏈發(fā)生改變，即糖基異常變化。各種異常的糖蛋白糖基可影響細胞的正常功能，如細胞的識別和黏附功能障礙，這是導致細胞惡性轉化的分子基礎。 隨著基因組學、凝集素和質譜等技術在糖鏈檢測中的應用，發(fā)現(xiàn)了許多與腫瘤相關的糖鏈結構。β1，6分支是細胞膜復雜型N一糖鏈的一種分支結構，文獻報道在結腸癌和肝癌細胞中β 1，6分支高表達，并且與預后差和腫瘤轉移程度具有相關性，動物實驗表明β1，6分支能夠促進腫瘤細胞在小鼠

2、體內的轉移能力：體外實驗證明β 1，6分支高表達的細胞運動能力明顯增強。但最近有文獻報道在膀胱癌中β1，6分支的表達與預后較好有關，在神經母細胞瘤中高表達GnT-V能夠促進腫瘤細胞的凋亡等等。因此β 1，6分支在腫瘤轉移中的作用以及作用機制有待于進一步研究。本論文的研究目的是觀察在小鼠乳腺癌細胞4TO7中β 1，6分支表達的差異對與腫瘤轉移相關的細胞行為學的影響，并初步探討其對細胞遷移能力影響的機制。為腫瘤細胞膜糖鏈β1，6分支與腫瘤轉

3、移的關系研究提供了新途徑。 第一部分：細胞表面β 1，6分支糖鏈對小鼠乳腺癌細胞腫瘤轉移相關行為學的影響本部分實驗用RNA干擾的方法構建了GnT-V表達差異的兩株小鼠乳腺癌細胞4T07-siRNA3和4TO7-mock，并對它們的轉移相關細胞行為學進行了研究。 首先針對小鼠GnT-V的DNA序列設計并構建了用于轉染小鼠乳腺癌4TO7細胞的干擾質粒：pSi/encerU6-siRNA1，psilencefU6-siRNA2

4、和pSilenceru6-siRNA3。用以上質粒轉染細胞并挑取陽性單克隆。獲得了細胞表面表達β1，6分支降低約60％的細胞模型：4TO7-siRNA3。然后運用劃痕法、Transwell小室法檢測了4TO7-siRNA3細胞遷移行為的改變：用Metrigel模擬細胞外基質，檢測了4TO7-siRNA3細胞侵襲行為的改變；運用細胞黏附實驗檢測了細胞與細胞外基質FN黏附能力的改變：最后用熒光標記的鬼比環(huán)肽檢測細胞遷移時微絲的變化。結果表明

5、：相對于陰性對照4TO7-siRNA3細胞與FN黏附增強，遷移和侵襲能力降低，而且β1，6分支表達降低能夠影響細胞骨架actin的解聚和聚合功能。 第二部分：高表達β1，6分支糖鏈增強小鼠乳腺癌細胞4TO7遷移能力的機制探討本部分以β1，6分支對EGFR的影響為切入點對β1，6分支表達增高能夠顯著增強小鼠乳腺癌細胞4TO7遷移能力的機制進行了仞步探討。在表皮生長因子EGF的刺激下4TO7-mock細胞的遷移分為兩個階段，8小時之

6、后遷移速度存在著一個明顯的突躍。本部分實驗檢測了4TO7-siRNA3和4TO7-mock細胞上EGFR表達水平和EGFR上β1，6分支修飾，EGF刺激下兩株細胞遷移時EGFR的磷酸化、PKC-δ和Erk信號的激活情況，結果表明：EGFR上增加了的β 1，6分支糖鏈修飾能夠增強遷移的第二個階段中Erk和PKC-δ的信號強度，而抑制了與細胞骨架調節(jié)密切相關的RhoA的信號。β1，6分支通過增加EGFR的糖鏈修飾，進而影響其下游信號通路信號